本品為豆科植物大豆Glycine max(L.)Merr.的成熟種子發(fā)芽干燥而得。大豆用水浸泡至膨脹，將水放出，用濕布覆蓋，每日用清水沖洗一次或噴淋二次，待芽長(zhǎng)至0.5cm～1cm時(shí)，取出，干燥。
【性狀】 本品略呈腎形，長(zhǎng)約8mm，寬約6mm。表面黃色或黃棕色，微皺縮，一側(cè)有明顯的臍點(diǎn)，一端有1彎曲胚根。外皮質(zhì)脆，多破裂或脫落。子葉2片，黃色。氣微，味淡，嚼之有豆腥味。以粒大、飽滿(mǎn)者為佳。
【鑒別】 (1)取本品粉末1g，加稀乙醇30ml，超聲處理30分鐘，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉∫掖?ml使溶解，取上清液，作為供試品溶液。另取亮氨酸對(duì)照品，加稀乙醇制成每1ml 含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(19：5：5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(2)取本品粉末2g，加80%乙醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0%乙醇1ml使溶解，取上清液，作為供試品溶液。另取染料木苷對(duì)照品，加80%乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10μl、對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(10：1.7：1.3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)缸中預(yù)飽和30分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
【檢查】水分 不得過(guò)11.0%(附錄Ⅸ H)。
總灰分 不得過(guò)7.0%(附錄Ⅸ K)
【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法(附錄Ⅵ D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇為流動(dòng)相A，以1%醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫;柱溫35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。理論板數(shù)按大豆苷、染料木苷峰計(jì)算均不得低于5000。
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對(duì)照品溶液的制備 取大豆苷、染料木苷對(duì)照品各約10mg，精密稱(chēng)定，置50ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻;精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)**篩)約1.0g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，稱(chēng)定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心(2000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品按干燥品計(jì)算，含大豆苷(C21H20O9)和染料木苷(C21H20O10)的總量不得少于0.08%。
【炮制】 取燈心草、淡竹葉置鍋內(nèi)，加入適量水煎煮二次，**次60分鐘，第二次30分鐘，合并煎液，濾過(guò)。濾液與大豆黃卷共置鍋內(nèi)，煮至藥液被吸盡，取出，干燥。
每100kg凈藥材用燈心草1kg、淡竹葉2kg。
Syltech500型高效液相色譜儀(單泵配置/梯度)
1 泵 P501型恒流高壓輸液泵
1.1 液體輸送原理：雙柱塞串聯(lián)往復(fù)方式，自動(dòng)脈沖抑制系統(tǒng)，另配有溶劑壓縮因子程序，能自動(dòng)補(bǔ)償流量，液體輸送更精準(zhǔn)
1.2 *大輸送壓力：大于等于6000PSI(約42MPa以上)
1.3 流速精度：0.1%
1.4 流速范圍：(0.001-10.000)mL/min*小增量0.001mL/min
1.5 柱塞桿清洗：不需另配設(shè)備即可自動(dòng)柱塞桿清洗，保護(hù)柱塞桿
1.6 安全性：配有開(kāi)機(jī)自檢，高低壓報(bào)警和保護(hù)功能
1.7 梯度系統(tǒng)：二元梯度混合系統(tǒng)/單泵系統(tǒng)
1.7.1 混合范圍：0到100%
1.7.2 混合原理：高壓混合
1.7.3 混合液體數(shù):大于等于2元
1.7.4 脫氣裝置：內(nèi)外置脫氣均可
2 紫外檢測(cè)器UV501型紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器
2.1 光源：氘燈(鎢燈可選)氘燈壽命2000個(gè)小時(shí)，保證使用壽命1000小時(shí)以上
2.2 波長(zhǎng)范圍：190到720nm(步增1nm)
2.3 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：<±1nm
2.4 波長(zhǎng)重現(xiàn)性：<±0.5nm
2.5 帶寬：小于5nm
2.6 噪音：<±2.5*10-5AU(特定條件下)
2.7 漂移：<±2.5*10-4AU(特定條件下)
2.8 流通池體積：10ul體積、光程10mm
2.9 吸收量程：0.01AU/V-10AU/V(共十檔)進(jìn)樣信號(hào)控制(事件)，自動(dòng)調(diào)零
2.10 功能：具有定點(diǎn)波長(zhǎng)測(cè)量，數(shù)據(jù)處理硬件嵌入檢測(cè)器，數(shù)字信號(hào)直接采集處理功能
3 色譜柱：VertexTMXB-C18 4.6*250mm*5um 液相色譜柱、配保護(hù)柱
4 柱溫箱：室溫上10度到100度(0.1度增量)
5 N2010藥典版色譜工作站" target="_blank">色譜工作站：色譜工作站(滿(mǎn)足2010版藥典要求，美國(guó)制作)中英文操作軟件，支持WIN9X/XP/2000/2003等操作系統(tǒng)，硬件嵌入檢測(cè)器，數(shù)字信號(hào)直接采集處理
6 Vertex7825i手動(dòng)進(jìn)樣閥：Vertex7825i手動(dòng)進(jìn)樣閥(帶遠(yuǎn)程觸發(fā)開(kāi)關(guān))，自帶20UL定量，耐壓8000psi,進(jìn)樣次數(shù)超1萬(wàn)次以上
高效液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中針對(duì)這種精密而又運(yùn)用廣泛的科學(xué)儀器。
下面我們來(lái)聊一聊基線(xiàn)。HPLC常見(jiàn)的基線(xiàn)問(wèn)題主要有基線(xiàn)漂移以及基線(xiàn)噪音。
基線(xiàn)漂移
線(xiàn)漂移基線(xiàn)漂移是色譜工作者普遍遇到的問(wèn)題。一般說(shuō)來(lái)，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線(xiàn)容易漂移，大概要30min的平衡時(shí)間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長(zhǎng)下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，仍然發(fā)現(xiàn)基線(xiàn)漂移，原因可能有以下幾種：
1、柱溫波動(dòng)
控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。
2、流通池被污染或有氣體
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開(kāi)柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
3、紫外燈能量不足
更換新的紫外燈
4、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
基線(xiàn)噪音
對(duì)于紫外檢測(cè)器,氘燈光源打開(kāi)后要預(yù)熱30min以上,基線(xiàn)才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測(cè)物無(wú)關(guān)的檢測(cè)器輸出信號(hào)的隨機(jī)擾動(dòng)變化,分短期噪聲和長(zhǎng)期噪聲兩種。
基線(xiàn)噪音(規(guī)則的)
產(chǎn)生基線(xiàn)噪音的原因有：在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣;漏液;流動(dòng)相混合不完全;溫度影響(柱溫過(guò)高,檢測(cè)器未加熱);在同一條線(xiàn)上有其他電子設(shè)備;泵振動(dòng)。
了避免基線(xiàn)噪音,在正式進(jìn)樣之前,需要對(duì)流動(dòng)相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動(dòng);泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動(dòng)使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設(shè)備時(shí)斷開(kāi)LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來(lái)自于外部,加以更正;泵振動(dòng)時(shí)在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
基線(xiàn)噪音(不規(guī)則的)
(1)漏液：檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。
(2)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動(dòng)相的組成。
(3)流動(dòng)相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動(dòng)相。
(4)檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題：斷開(kāi)檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正。
(5)系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng);檢測(cè)器內(nèi)有氣泡,清洗檢測(cè)器,在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。
(6)流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池;
(7)檢測(cè)器燈能量時(shí)不足更換燈;
(8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。
(9)流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),不建議使用泵的混合裝置。
高效液相色譜儀操作步驟如下：
1)過(guò)濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜.
2)對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開(kāi)hplc工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。
4)進(jìn)入hplc控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5)有一段時(shí)間沒(méi)用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000。
7)設(shè)計(jì)走樣方法。
8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。
9)關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
10)填寫(xiě)登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。
11)流動(dòng)相均需色譜純度，水用20m的去離子水。
12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過(guò)柱子。
13)所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。
14)壓力不能太大，可以不要超過(guò)2000psi。
高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。
1、氘燈外罩污染：不要用手直接接觸氘燈外罩，手上含有的油脂類(lèi)物質(zhì)會(huì)阻礙氘燈的光源的發(fā)射光，導(dǎo)致讀數(shù)偏低。一旦不小心用手直接接觸到了氘燈，在氘燈安裝之前可用異丙醇對(duì)氘燈做清潔工作。 2、氘燈的開(kāi)關(guān)頻率：頻繁的開(kāi)關(guān)及過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的開(kāi)燈等都會(huì)對(duì)燈的壽命產(chǎn)生影響，一般氘燈點(diǎn)亮后須要30分鐘左右的穩(wěn)定時(shí)間。特別注意的是在氘燈剛剛關(guān)閉時(shí)要等其冷卻之后才能再次開(kāi)啟。因?yàn)殡疅羧绻谖蠢鋮s狀態(tài)時(shí)被打開(kāi)，很可能造成燈絲整體結(jié)構(gòu)的燒壞。 3、避免劇烈物理震蕩：如燈是亮著的話(huà)，很可能將燈絲弄壞甚至是弄斷。（因?yàn)楫?dāng)氘燈點(diǎn)亮?xí)r其溫度有2700K度，此時(shí)燈絲幾乎是液態(tài)的。） 4、可更換氘燈的信號(hào)： a、燈的外殼邊緣看不見(jiàn)藍(lán)色的光線(xiàn)。（肉眼可見(jiàn)）； b、石英外套變黑。（燈關(guān)時(shí)進(jìn)行檢查，冷卻并更換）； c、之前分析方法中從未出現(xiàn)過(guò)的非線(xiàn)形現(xiàn)象（光的吸收率不為線(xiàn)形）； d、在正常設(shè)置情況下基線(xiàn)漂移嚴(yán)重； e、正常進(jìn)樣時(shí)不出峰。液相色譜儀氘燈使用的注意事項(xiàng)
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