薄層色譜儀操作方法:
(1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,
去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2~
0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置
有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
(2) 點樣 除另有規(guī)定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底
邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為
宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
(3) 展開 展開缸如需預先用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,并在壁
上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封缸頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或
按正文規(guī)定操作。
將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5
~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10~15cm),
取出薄層板,晾干,按各品種項下的規(guī)定檢測。
(4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。
薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點及使用說明,
結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果
的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與
對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,
只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果。
斑點洗脫后測定法
薄層經(jīng)展開后用刮刀或捕集器將斑點的吸附劑捕集后,再用適當有機溶劑洗脫,然后用可見、紫外分光光度法、熒光分光光 度法測定含量。
但樣品斑點不能噴顯色劑,以免影響不測定,斑點位置的確定方法。
樣品在紫外線下發(fā)射熒光的,可在紫外燈下觀察斑點并用針劃去斑點位置。
用碘蒸汽顯色,在組分處理出棕色斑點(碘吸附后會揮發(fā))。
用標準物對照,將標準點于邊上一測顯色時,蓋住樣品,定出斑點位置。
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一、根據(jù)相對分子質(zhì)量選擇:
1、相對分子質(zhì)量很低的樣品采用氣相色譜。
2、液液分配色譜、液固吸附色譜和離子交換色譜比較適合分析相對分子質(zhì)量為 200~2000 的樣品。
3、相對分子質(zhì)量大于 2000 的樣品,采用凝膠色譜為優(yōu)。
二、根據(jù)溶解度選擇:
1、溶于水并能離解的樣品,采用離子交換色譜。
2、溶于烴類(如苯或異辛烷等)的樣品,可采用液固吸附色譜。
3、溶于 CCl4 的樣品,多采用液液分配色譜和液固吸附色譜。
4、既溶于水又溶于異丙醇的樣品,常用水和異丙醇的混合液作液液分配色譜的流動相,以疏水性化合物作固定相。
三、根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇:
1、酸、堿化合物采用離子交換色譜。
2、脂肪族和芳香族采用液液分配色譜、液固吸附色譜。
3、異構(gòu)體采用液固吸附色譜。
4、同系物不同官能團和強氫鍵化合物采用液液分配色譜。