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維護色譜柱要操作這些 色譜柱常見問題解決方法

時間:2020-07-06    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導讀】一﹑去除樣品和流動相中的固體顆粒樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會



    一﹑去除樣品和流動相中的固體顆粒

    樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會引起液流不均,導致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。

    二﹑流動相的PH應在使用的范圍內(nèi)

    由于流動相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難使色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動相的PH值。

    三、使用保護柱或在線過濾器

    樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能完全消除固體顆粒物質(zhì),因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。

    如果色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩板被堵引起的,可選擇一下方式進行補救:

    1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。

    2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,然后反向使用。

    四﹑防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留

    強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應,需要一定的時間才會體現(xiàn)出來,但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì),因此要防止強保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。

    五﹑正確使用緩沖鹽

    緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。





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    氣相色譜柱利用色譜柱先將混合物分離,然后利用檢測器依次檢測已分離出來的組分。氣相色譜柱在石油、化工、生物化學、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面應用很廣。它除用于定量和定性分析外,還能測定樣品在固定相上的分配系數(shù)、活度系數(shù)、分子量和比表面積等物理化學常數(shù)。一種對混合氣體中各組成分進行分析檢測的儀器。

    老化色譜柱是氣相應用的一項常見工作,老化的目的在于去除固定相表面不穩(wěn)定的固定相流失碎片或污染物,讓色譜柱為即將進行的分析做好準備。通常,新柱初次使用、色譜柱放置一段時間后再次使用、或色譜柱受到一定污染或損傷后都需要進行適當?shù)睦匣?/p>

    氣相色譜柱老化的方法:

    1.首先使所有加熱部位(如進樣口和檢測器)降溫;

    2.將切割好的毛細管柱接到進樣口,開通載氣并保持適當流速,將色譜柱出口端插入盛有甲醇或乙醇的燒杯,正常情況下應能夠觀察有連續(xù)的氣泡冒出,否則應及時檢查是否有漏氣、色譜柱斷裂、或進樣口參數(shù)設置;

    3.用6倍柱體積(或吹掃約15min)的載氣吹掃色譜柱以排除柱內(nèi)可能存在的O2

    4.關閉爐箱,緩慢升溫至已知分析方法的最高溫度+20°C或色譜柱恒溫溫度上限-20°C后繼續(xù)老化2個小時

    氣相色譜柱老化的最高溫度一般不要超過色譜柱的恒溫溫度上限,初次老化可以升溫至色譜柱最高使用溫度(程序升溫溫度上限)老化一段時間,建議不超過10min。對于強極性色譜柱(如聚乙二醇固定相),建議采用較緩的程序升溫。






    手性色譜柱(Chiral HPLC Columns)是由具有光學活性的單體,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(Chiral Stationary Phases)。通過引入手性環(huán)境使對映異構體間呈現(xiàn)物理特征的差異,從而達到光學異構體拆分的目的。要實現(xiàn)手性識別,手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成,特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。由于這種作用力較微弱,因此需要仔細調(diào)節(jié)、優(yōu)化流動相和溫度以達到zui佳分離效果。

    在手性拆分中,溫度的影響是很顯著的。低溫增加手性識別能力,但可能引起色譜峰變寬而導致分離變差。因此確定手性分析方法過程中要考慮柱溫的影響,確定zui優(yōu)柱溫。

    迄今為止,尚沒有一種類似十八烷基鍵合硅膠(ODS)柱的普遍適用的手性柱。不同化學性質(zhì)的異構體不得不采用不同類型的手性柱,而市售的手性色譜柱通常價格昂貴,因此如何根據(jù)化合物的分子結構選擇適用的手性色譜柱是非常重要的。

    根據(jù)手性固定相和溶劑的相互作用機制,Irving Wainer首次提出了手性色譜柱的分類體系:

    第1類:通過氫鍵、π-π作用、偶級-偶級作用形成復合物。

    第2類:既有類型1中的相互作用,又存在包埋復合物。此類手性色譜柱中典型的是由纖維素及其衍生物制成的手性色譜柱。

    第3類:基于溶劑進入手性空穴形成包埋復合物。這類手性色譜柱中較為典型的是由Armstrong教授開發(fā)的環(huán)糊精型手性柱[2],另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物,如聚(苯基甲基甲基丙烯酸酯)形成的手性色譜柱也屬于此類。

    第4類:基于形成非對映體的金屬絡合物,是由Davankov開發(fā)的手性分離技術,也稱為手性配位交換色譜(CLEC)。

    第5類:蛋白質(zhì)型手性色譜柱。手性分離是基于疏水相互作用和極性相互作用實現(xiàn)。




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