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選擇優(yōu)良液相色譜儀的方法 液相色譜如何操作

時(shí)間:2020-07-06    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】首先是如何看指標(biāo)。液相色譜儀的指標(biāo)很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認(rèn)為要看主要技術(shù)指標(biāo),根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),儀器的主要指標(biāo)有噪音,漂移,最小檢測濃度,



    首先是如何看指標(biāo)。液相色譜儀的指標(biāo)很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認(rèn)為要看主要技術(shù)指標(biāo),根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),儀器的主要指標(biāo)有噪音,漂移,最小檢測濃度,定性定量重復(fù)性等。這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng),回路里去看,去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好,如接好色譜柱,進(jìn)樣閥,并且要通上流動(dòng)相。因?yàn)槟诜治鲋幸捕际锹?lián)接好以后才可以進(jìn)行分析的,而不是單單用個(gè)檢測器或是泵的。

    然后在這個(gè)基礎(chǔ)上,我們?cè)偃ケ容^這些主要指標(biāo)。

    1.噪音

    是指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動(dòng)。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度,噪音越大,檢測的靈敏度就越低。對(duì)于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會(huì)導(dǎo)致基線不穩(wěn),甚至影響分析結(jié)果。

    2.最小檢測濃度(最小檢測限)

    是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H(CL:最小檢測濃度Nd:噪音C:樣品濃度最小檢測濃度H:樣品峰高)由上式可見,最小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大,最小檢測濃度就越大,靈敏度就越低。某些廠家回避了這個(gè)指標(biāo),說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。

    3.漂移

    是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離,通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定,從而在一定程度上提高了分析效率。

    4.定性定量重復(fù)性

    主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo),這對(duì)于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的,這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性,這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。

    有的朋友會(huì)認(rèn)為這些指標(biāo)好像都是檢測器的。對(duì)的,但是就前面所說條件是要放在整個(gè)回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如:泵的脈動(dòng)會(huì)直接影響噪音指標(biāo),泵的流量準(zhǔn)確度、精確度指標(biāo),以及密封性不好也會(huì)影響相關(guān)指標(biāo)。所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)。

    液相色譜儀的最小檢測濃度和流通池的光程(體積)之間的關(guān)系與含義

    某些國產(chǎn)儀器在公布其技術(shù)指標(biāo)時(shí),大多只寫了“噪音和漂移”的指標(biāo)。用戶覺得指標(biāo)都差不多,但卻忽略了另外二個(gè)較為重要的指標(biāo):“最小檢測濃度和光程”,這二個(gè)指標(biāo)有什么作用呢?它們代表了什么含義?

    這里來解釋一下:

    最小檢測濃度是考驗(yàn)儀器的靈敏度。最小檢測濃度數(shù)值大,儀器的靈敏度就小,不能反應(yīng)真正的噪音和漂移水平。例如:我公司的最小檢測濃度小于1×10-8g/ml(萘/甲醇溶液),而某些儀器是:4×10-8g/ml(萘/甲醇溶液)。這就說明我們的儀器靈敏度大,可以檢測更微量的樣品。同樣如我公司儀器把最小檢測濃度調(diào)較得和其它產(chǎn)品是一樣,也就表明我們可以做得比其它產(chǎn)品噪音和漂移低4倍。

    最小檢測濃度=2×儀器的噪音×進(jìn)樣的樣品濃度/樣品的峰高值

    那光程又代表什么?我們先看下面一個(gè)公式,比爾定律:

    A=log(I0/I)=εCL

    A是吸收率;I0代表參照池的光強(qiáng);I為樣品池的光強(qiáng);ε為摩爾吸光系數(shù);C是樣品濃度;L就是流通池的光程。

    可以看出在同樣的“C”樣品濃度情況下,“L”流通池的光程越大,儀器的“A吸收率”也就越大。這樣可以檢測到的樣品濃度就越小。為什么有些廠家把儀器的流通池光程做得很小,有些只有:3.5mm、4.5mm或5.5mm,而不是我公司的8mm。這是因?yàn)檫@些廠家不能有效的降低整個(gè)系統(tǒng)的“噪音和漂移水平”,只能犧牲流通池光程,也就是犧牲了儀器的檢測靈敏度和最小檢測濃度,來達(dá)到降低“噪音和漂移水平”目的。用通俗的說法比喻:HPLC就是一臺(tái)音響,光程就是這臺(tái)音響的音量控制鍵,光程越小就是把音量調(diào)小了,耳朵對(duì)音響本身的噪音和失真(可以理解為儀器的噪音和漂移)感覺就越小。但也就說明了這些儀器整體系統(tǒng)的制造水平不高。





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【導(dǎo)讀】高效液相色譜儀分析中,選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮流動(dòng)相與填料的作用、純度、與檢測器的匹配、粘度、對(duì)樣品的溶解度和樣品回收等方面。1、流動(dòng)相與填料的作用:流動(dòng)相應(yīng)



    高效液相色譜儀分析中,選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)考慮流動(dòng)相與填料的作用、純度、與檢測器的匹配、粘度、對(duì)樣品的溶解度和樣品回收等方面。

 


    1、流動(dòng)相與填料的作用:


    流動(dòng)相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。


    低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會(huì)溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。


    堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。


    酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。


    2、純度:


    色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過有關(guān),特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。


    3、與檢測器的匹配:


    當(dāng)使用UVD時(shí),所用流動(dòng)相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。


    當(dāng)使用RID時(shí),應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相,以提高靈敏度。


    4、粘度:


    高粘度溶劑會(huì)影響溶質(zhì)的擴(kuò)散和傳質(zhì),使柱效降低,還會(huì)使柱壓增加,分離時(shí)間延長。盡量選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動(dòng)相。


    5、對(duì)樣品的溶解度:如果溶解度欠佳,樣品會(huì)在色譜柱內(nèi)沉淀,不但影響純化分離,而且會(huì)使色譜柱惡化。


    6、樣品回收:應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。


    高效液相色譜儀分析選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的問題:


    1.盡量使用高純度溶劑作流動(dòng)相,防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。不純的溶劑會(huì)引起基線不穩(wěn),產(chǎn)生偽峰。


    2.避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降和損壞色譜柱,如使固定液溶解流失和酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。


    3.樣品在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度,防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。


    4.流動(dòng)相粘度低(粘度適中)。若使用高粘度溶劑,會(huì)增高壓力,不利于分離。常用低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度過低的溶劑也不宜采用,如戊烷等,它們?nèi)菀自谏V柱和檢測器內(nèi)形成氣泡,影響分離。


    5.化學(xué)穩(wěn)定性好。


    6.流動(dòng)相應(yīng)滿足檢測器的要求。


    對(duì)于紫外吸收檢測器,應(yīng)注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長長。所謂溶劑的紫外截止波長是指當(dāng)小于截止波長的輻射通過溶劑時(shí),溶劑對(duì)此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收,此時(shí)溶劑被看作是光學(xué)不透明的,會(huì)嚴(yán)重干擾組分的吸收測量。


    對(duì)于示差折光檢測器,要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相,以達(dá)到zui高靈敏度。

    液相色譜儀,看你分離的樣品的種類,看流動(dòng)相是否和樣品互溶,分離程度,一般加水多少,甲醇,乙腈很多種,看樣品的沸點(diǎn),溶解性。





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