安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作
1. 目的：明確安捷倫液相色譜儀的規(guī)范操作，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
2. 范圍：適用于安捷倫液相色譜儀。
3. 職責(zé)：檢驗(yàn)人員對(duì)此負(fù)責(zé)。
4. 操作規(guī)程：
4.1 系統(tǒng)組成
本系統(tǒng)由1個(gè)溶劑二元輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、手動(dòng)進(jìn)樣閥、柱溫箱、檢測(cè)器、化學(xué)工作站和電腦等組成。
4.2 準(zhǔn)備
4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min。
4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動(dòng)相流向一致）和定量環(huán)。
4.2.3 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾。
4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常
4.1 將待測(cè)樣品按要求前處理，準(zhǔn)備HPLC 所需流動(dòng)相，檢查線路是否連接完好，廢液瓶是否夠用等。
4.3開(kāi)機(jī)：
4.3.1 打開(kāi)計(jì)算機(jī),進(jìn)入中文Windows XP畫(huà)面,并運(yùn)行CAG Bootp Server程序。
4.3.2 打開(kāi) 1200 LC 各模塊電源。
4.3.3 待各模塊自檢完成后，雙擊[Instrument 1 Online]圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1200LC
通訊，進(jìn)入的工作站畫(huà)面如下所示。
4.3.4 從[視圖]菜單中選擇[方法和運(yùn)行控制]畫(huà)面, 點(diǎn)擊[視圖]菜單中的[顯示頂部 工具欄]， [ 顯示狀態(tài)工具欄]，[系統(tǒng)視圖],[樣品視圖]，使其命令前有[√]標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。
4.3.5 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。
4.3.6 打開(kāi)沖洗閥。
4.3.7 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo)，點(diǎn)擊[設(shè)置泵…]選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。
4.3.8 設(shè)流速：5ml/min，點(diǎn)擊[確定]。
4.3.9 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo)，點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng)，選中[啟動(dòng)]，點(diǎn)擊[確定] ，則系統(tǒng)開(kāi)始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。
4.3.10 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo)，點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng)，選中[關(guān)閉]，點(diǎn)擊[確定]關(guān)泵， 關(guān)閉沖洗閥。
4.3.11 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo)，點(diǎn)擊 [設(shè)置泵…選項(xiàng)]，設(shè)流速：1.0ml/min。
4.3.12 點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示（以單元泵為例），輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點(diǎn)擊[確定]。
4.4 數(shù)據(jù)采集方法編輯
4.4.1開(kāi)始編輯完整方法：從[方法]菜單中選擇[編輯完整方法…] 項(xiàng)，如下圖所示選中除[數(shù)據(jù)分析 ]外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫(huà)面。 4.4.2方法信息
4.4.2.1在[方法注釋]中加入方法的信息（如：測(cè)試方法）。 4.4.2.2 點(diǎn)擊 [確定]， 進(jìn)入下一畫(huà)面。 4.4.3 泵參數(shù)設(shè)定
4.4.3.1 在[流速]處輸入流量,如1ml/min，在[溶劑 B]處輸入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[時(shí)間表] ,編輯梯度。在[壓力限]處輸入柱子的zui大耐高壓，以保護(hù)柱子。
4.4.3.2 點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫(huà)面。
4.4.4 柱溫箱參數(shù)設(shè)定
4.4.4.1 在[溫度]下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度,如：40度。并選中它,點(diǎn)擊[更多>>] 鍵,如圖所示,選中[與左側(cè)相同]，使柱溫箱的溫度左右一致。
4.4.4.2 點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫(huà)面。
4.4.5 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇zui大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬：一般選擇zui大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域 。參比帶寬：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈。
4.4.6 在[ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ]中選中[ 數(shù)據(jù)采集]，點(diǎn)擊[確定]。
4.4.7 點(diǎn)擊[方法]菜單，選中[方法另存為…]，輸入一方法名，如[測(cè)試]，點(diǎn)擊[確定]。
4.4.8 從菜單 [視圖]中選中[在線信號(hào)],選中[信號(hào)窗口1],然后點(diǎn)擊[改變…] 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊[確定]。(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)10,選中[信號(hào)窗口2]。
單擊[改變]鍵，即可彈出右側(cè)的[編輯信號(hào)圖譜]窗口，進(jìn)而選擇所需的譜圖信號(hào)。 4.4.9 從[運(yùn)行控制]菜單中選擇[樣品信息]選項(xiàng)，如下圖所示，輸入操作者名稱，如[安裝工程師]；在[數(shù)據(jù)文件 ]中選擇[手動(dòng)]或[前綴/計(jì)數(shù)器]。區(qū)別: 手動(dòng)--每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Pr—在前綴/計(jì)數(shù)器----[前綴]框中輸入前綴，在[計(jì)數(shù)器]框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002……。
4.4.10 點(diǎn)擊[確定] ,從[儀器] 菜單選擇[系統(tǒng)開(kāi)啟]。
4.4.11 等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度?。?um-10um）、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)，在保健食品功效成分、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測(cè)定等應(yīng)用廣泛。世界上約有80％的有機(jī)化合物可以用HPLC來(lái)分析測(cè)定。
高效液相色譜的分離過(guò)程HPLC，借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
高效液相色譜儀操作步驟：
1)過(guò)濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2)對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開(kāi)HPLC工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀)，連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。
4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5)一段時(shí)間沒(méi)用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10ml/min。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。
7)設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。
8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過(guò)濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9)關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
儀器網(wǎng)-專業(yè)分析儀器服務(wù)平臺(tái),實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備交易網(wǎng),儀器行業(yè)專業(yè)網(wǎng)絡(luò)宣傳媒體。
相關(guān)熱詞：
等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
液相色譜儀在人們的生活中占有很大一部分，但是由于沒(méi)有認(rèn)真的看說(shuō)明書(shū)，導(dǎo)致一些操作上的問(wèn)題，使液相色譜儀的使用壽命變短，那到底出現(xiàn)故障我們改怎么解決呢，這篇文章就是針對(duì)這個(gè)問(wèn)題來(lái)進(jìn)行討論的。
1、氣泡溢出
流動(dòng)相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無(wú)論打開(kāi)purge鍵幾次，都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過(guò)濾器，緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。處理過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時(shí)，輕輕震蕩幾次，再將過(guò)濾器用純水清洗幾次，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，繼續(xù)將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出，說(shuō)明過(guò)濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時(shí)即可。
2、峰面積重復(fù)性不佳
(1)進(jìn)樣閥漏液。
(2)加樣針不到位。
(3)液量不足。處理對(duì)于第一種情況更換進(jìn)樣閥墊圈；對(duì)于第二種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲(chǔ)液器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并更換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，完全溶解，盡量減少對(duì)色譜柱的污染，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶液，以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞；色譜柱作好標(biāo)記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
3、柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)。
(2)樣品污染沉積。處理對(duì)于第一種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對(duì)于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定)，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
4、既無(wú)壓力指示，又無(wú)液體流過(guò)
(1)泵密封墊圈磨損。
(2)大量氣泡進(jìn)入泵體。處理對(duì)于第一種情況，更換密封墊圈；對(duì)于第二種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
5、壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
6、出峰不佳，峰分叉
(1)色譜柱被污染。
(2)柱頭填料塌陷。處理對(duì)于第一種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對(duì)于第二種情況，擰開(kāi)柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料)，裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
449717568
