1、舊
色譜柱柱效低，分離不好，柱入口床層塌陷
原因：填料被
流動(dòng)相溶蝕而流失。
解決方法：用同型填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。對(duì)硅膠質(zhì)填料，流動(dòng)相PH值在2—7范圍內(nèi)，否則可能被溶蝕。
2、柱使用—段時(shí)間后，柱效下降，出現(xiàn)峰拖尾
原因：柱入口床層被污染。
解決方法：用強(qiáng)溶劑沖洗20-30ml，若效果不明顯應(yīng)廢棄。
3、舊色譜柱柱效低分離不好，有時(shí)出現(xiàn)雙峰
原因：入門(mén)填料被污染變質(zhì)所致。
4、新柱柱效低柱外死體積大
原因：樣品在流動(dòng)相中
溶解不好，影響傳質(zhì)過(guò)程。更換連接管，重新連接色譜柱，降低死體積。
解決方法：使用合適的流動(dòng)相或使用流動(dòng)相溶解樣品。
5、新柱接到儀器上后，柱頭漏液
原因：柱接頭與儀器之間連接管的壓環(huán)變形量不夠。
解決方法：用扳手順時(shí)針?lè)较驍Q緊1／4圈直到不漏液為止。
? 6、柱壓升高
原因：色譜柱入U(xiǎn)濾片被流動(dòng)相或樣品中顆粒堵住。
樣品組分在濾片上沉淀堵住濾片。
解決方法：卸下入口接頭的濾片，使用1：1的硝酸溶液超聲清洗5min，再用水、甲醇清洗除去水份。樣品及流動(dòng)相使用0．45μm濾膜除去微量雜質(zhì)。使用流動(dòng)相作溶劑配制樣品。
7、新柱接到儀器上后，檢測(cè)器出口不斷有小氣泡出現(xiàn)
原因：①同上。
?、诹鲃?dòng)相脫氣不徹底特別是MeOH／H20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。
解決方法：①同上。
②配好流動(dòng)相后一定要進(jìn)行脫氣處理。
8、新柱接到儀器上后，啟動(dòng)儀器沒(méi)有柱壓降
原因：柱放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。
解決方法：繼續(xù)開(kāi)
泵，用流動(dòng)相將柱內(nèi)氣體置換掉。
9、新柱接到儀器上后柱壓降不斷增加，甚至超過(guò)儀器的耐壓限
原因：柱入口濾片被固體顆粒堵塞或被毒菌堵塞。
解決方法：更換或清洗柱入口濾片；用0．45μm過(guò)濾膜過(guò)濾流動(dòng)相除去微小顆粒物。
10、使用—段時(shí)間后，柱效下降，分離不好
原因：①柱填料被流動(dòng)相溶解而流失。
?、谥盍媳粯悠冯s質(zhì)污染。
解決方法：①推薦使用予柱。如柱床層塌陷，用相同型號(hào)填料填補(bǔ)。
?、谕扑]使用保護(hù)柱或用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱除去污染雜質(zhì)。
11、柱使用一段時(shí)間后，柱效下降出現(xiàn)雙峰
原因：柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。
解決方法：用強(qiáng)溶劑沖洗除去雜質(zhì)。
12、進(jìn)樣次數(shù)增加柱壓降逐漸增加
原因：①樣品中含有不溶于流動(dòng)相的微小顆粒物。
?、跇悠吩诹鲃?dòng)相中析出微小結(jié)晶。
解決方法：①用0．45μm過(guò)濾膜過(guò)濾樣品。
②推薦使用流動(dòng)相溶解樣品。
13、使用緩沖液作流動(dòng)相時(shí)，柱壓降升高很快
原因：霉菌生長(zhǎng)所致。
解決方法：①在流動(dòng)相中加入有毒物質(zhì)或加疊氯化鈉防止霉菌生長(zhǎng)。
?、趯?shí)驗(yàn)結(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗20-30ml后關(guān)機(jī)。
系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。 其中輸液泵、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、與柱或保護(hù)住、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。 下面就介紹下高效液相色譜使用中的幾個(gè)重要環(huán)節(jié)吧。 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作 1.過(guò)濾流動(dòng)相。為了保證流動(dòng)相潔凈，流動(dòng)相使用前都必須微膜過(guò)濾。 2.流動(dòng)相脫氣。為了避免流動(dòng)相中氣泡對(duì)儀器（氣泡可能會(huì)對(duì)儀器及相關(guān)設(shè)備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結(jié)果的影響。 3.運(yùn)行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%異丙醇溶液 （5%甲醇或異丙醇等有機(jī)相溶液能避免微生物污染，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會(huì)導(dǎo)致鹽結(jié)晶析出，碰到酸堿類(lèi)物質(zhì)可能會(huì)有比較強(qiáng)烈的反應(yīng)；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強(qiáng)；也有采用純水清洗的，這樣如果儀器每天使用還行，如果長(zhǎng)期不用，為了防止微生物繁殖，純水還得用含有有機(jī)相的清洗液置換出去） 沖洗，這是為了保護(hù)泵柱塞和密封圈等部件在泵運(yùn)行時(shí)不被結(jié)晶鹽等磨損而導(dǎo)致泵頭漏液。 4.每天運(yùn)行儀器前先排氣。一般的液相色譜儀都有排氣功能，沒(méi)有的可以不接色譜柱開(kāi)機(jī)運(yùn)行幾分鐘排氣。 5.泵運(yùn)行時(shí)盡量不采用大流量模式（主要是換流動(dòng)相或排氣泡等，流量盡量設(shè)為3.0ml/min以?xún)?nèi)，這樣更有利于保護(hù)泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。 6.分析前先對(duì)色譜系統(tǒng)（整個(gè)流路）進(jìn)行沖洗及平衡，尤其是色譜柱。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘，最后換含緩沖鹽或酸堿類(lèi)物質(zhì)的流動(dòng)相平衡30分鐘。色譜柱如果長(zhǎng)期沒(méi)用，每一步?jīng)_洗、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）。 如果流動(dòng)相中不含緩沖鹽或酸堿類(lèi)物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動(dòng)相。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類(lèi)物質(zhì)，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。 7.如果色譜柱需要控溫（升溫），要先運(yùn)行泵后再設(shè)柱溫箱溫度。 8.待儀器運(yùn)行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個(gè)是經(jīng)驗(yàn)值），方可進(jìn)樣。 樣品前處理 1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多，否則色譜柱處理起來(lái)壓力很大。 2.進(jìn)樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過(guò)濾。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意事項(xiàng) 1.為了避免進(jìn)樣器殘留影響，進(jìn)樣前先對(duì)進(jìn)樣器進(jìn)行清洗（這個(gè)不是必須的，但盡量是每進(jìn)一針樣品或標(biāo)準(zhǔn)品前都清洗進(jìn)樣器和進(jìn)樣針，當(dāng)然同一樣品也可以不洗，不同樣品盡量洗），清洗順序?yàn)榧兯⒓状?、流?dòng)相。 2.每進(jìn)一針樣品后要對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行一次沖洗、平衡后再進(jìn)下一針樣品（等度要求不高，梯度要求相對(duì)高，主要是沖洗色譜柱中殘留的強(qiáng)保留物質(zhì)）。 實(shí)驗(yàn)完畢的后續(xù)工作 1.做完樣要先清洗進(jìn)樣器，清洗順序?yàn)榧兯?、甲醇?/p> 2.關(guān)閉柱溫箱溫度設(shè)置。 3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘，待基線基本走平停泵。如果流動(dòng)相中不含緩沖鹽或酸堿類(lèi)物質(zhì)，沖洗時(shí)流動(dòng)相可直接換為純甲醇。色譜柱用完后如果長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不會(huì)再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的，沖洗后卸下，兩端密封保存。 4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時(shí)再停泵、關(guān)機(jī)（這一點(diǎn)需特別注意，目的是防止溫度過(guò)高損壞色譜柱）。 5.關(guān)機(jī)前用清洗液清洗柱塞桿。有關(guān)高效液相色譜儀的使用
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