1、測(cè)量波長(zhǎng)
在定量分析中，為了提高測(cè)定的靈敏度，入射光的波長(zhǎng)應(yīng)選擇被測(cè)物的最大吸收波長(zhǎng)λmax，如果λmax有干擾，可選擇另一條靈敏度稍低、但能避免干擾的譜線，所以，適當(dāng)選擇入射光的波長(zhǎng)，不僅能提高測(cè)定的靈敏度，還能提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。
2、狹縫寬度
狹縫寬度過大，入射光的單色性差；狹縫寬度太小，入射光的強(qiáng)減弱。狹縫寬度過大或過小均會(huì)造成靈敏度降低，較好選擇是產(chǎn)生最小誤差情下的最大狹縫。一般選用儀器的狹縫寬琶度應(yīng)小于待測(cè)樣品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸光度值會(huì)偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸光度不再；加為準(zhǔn)，對(duì)于大部分被測(cè)品種，可以使用2nm縫寬。
3、控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶?br/> 可通過控制被測(cè)物濃度或改變吸收池厚度來實(shí)現(xiàn)吸光度合理的范圍，以盡量減小測(cè)量誤差。一般吸光度盡量控制在0.1-0.8范圍。
4、空白溶液的選擇
空白溶液是用來調(diào)節(jié)吸光度測(cè)量工作零點(diǎn)即A=0，T=100%的溶液，以消除溶液中其它基體組分以及吸收池和溶劑對(duì)入射光的反射和吸收所帶來的誤差。根據(jù)情況不同，常用空白溶液有如下幾種選擇。
?、偃軇┛瞻桩?dāng)溶液中只有待測(cè)組分在測(cè)定波長(zhǎng)下有吸收，而其它組分無吸收時(shí)，可用純?nèi)軇┳骺瞻住?br/> ②試劑空白如果顯色劑或其它試劑有吸收，而待測(cè)試樣溶液無吸收，則用不加待測(cè)組分的其它試劑作空白。
③試樣空白如果試樣基體有吸收，而顯色劑或其它試劑無吸收，則用不加顯色劑的試樣溶液作空白。
紫外可見分光光度計(jì)對(duì)于我們來說熟悉卻也比較難讀懂理解的。
天天有人提起他的名字卻沒多少人知道他的工作原理。
下面我們來淺談一下。
光譜工作原理：
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線；
可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比；
如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。
如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。
這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同;
這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。
紫外可見分光光度計(jì)的工作環(huán)境：
1）分光光度計(jì)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5-35℃，相對(duì)濕度不超過85%
2）儀器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，且避免強(qiáng)烈的震動(dòng)或持續(xù)的震動(dòng)
3）室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，且應(yīng)避免直射日光的照射
4）電扇不宜直接向儀器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用
5）盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電氣設(shè)備
6）避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場(chǎng)所使用
紫外可見分光光度計(jì)引用新型技術(shù)，其功能強(qiáng)大，采用單色器技術(shù)，波長(zhǎng)范圍190-1100nm，是各種涉及水和廢水分析領(lǐng)域的通用儀器，應(yīng)用范圍包括市政和工業(yè)廢水，飲用水，加工過程用水，地表水，冷卻水和鍋爐補(bǔ)給水等。
紫外可見分光光度計(jì)應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用，對(duì)于一個(gè)水系的監(jiān)測(cè)分析和綜合評(píng)價(jià)，一般包括水相（溶液本身）、固相（懸浮物、底質(zhì)）、生物相（水生生物）。在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測(cè)中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測(cè)物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時(shí)必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測(cè)的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等;
在植物生化分析中可用于檢測(cè)葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測(cè)煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
紫外可見分光光度計(jì)維護(hù)要點(diǎn)：
一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也會(huì)影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵等。
三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，建議由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑，最后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校與記錄。
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