工作原理
臨床常用的微量移液器的設(shè)計依據(jù)是胡克定律:即在一定限度內(nèi)彈簧伸展的長力與彈力成正比,也就是移液器內(nèi)的液體體積與移液器內(nèi)的彈簧彈力成正比。
微量移液器加樣的物理學(xué)原理有兩種:使用空氣墊加樣和使用無空氣墊的活塞正移動(positivedisplacement)加樣。這兩種不同原理的微量移液器有其不同的特定應(yīng)用范圍
1.選擇合適的移液器
移取標(biāo)準(zhǔn)溶液(如水、緩沖液、稀釋的鹽溶液和酸堿溶液)時多使用空氣置換移液器,移取具有高揮發(fā)性、高黏稠度以及密度大于2.0g/cm的液體或者在臨床聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)測定中的加樣時使用正向置換移液器。如移取15ul的液體,選擇zui大量程為20ul的移液器,選擇50ul及其以上量程的移液器都不夠準(zhǔn)確。
2.設(shè)定移液體積
調(diào)節(jié)移液器的移液體積控制旋鈕進(jìn)行移液量的設(shè)定。調(diào)節(jié)移液量時,應(yīng)視體積大小而旋轉(zhuǎn)刻度至超過設(shè)定體積的刻度,再回調(diào)至設(shè)定體積,以保證移取的zui佳度。
3.裝配吸頭
使用單通道移液器時,將可調(diào)式移液器的嘴錐對準(zhǔn)吸頭管口,輕輕用力垂直下壓使之裝緊。使用多通道移液器時,將移液器的排對準(zhǔn)個管嘴,傾斜插入,前后稍微搖動擰緊。
4.移液
保證移液器、吸頭和待移取液體處于同一溫度;然后用待移取吸液體潤洗吸頭1-2次,尤其是黏稠的液體或密度與水不同的液體。移取液體時,將吸頭垂直浸入液面以下2-3mm深度(嚴(yán)禁將吸頭全部插入溶液中),緩慢均勻地松開操作桿,待吸頭吸入溶液后靜置2-3秒,并斜貼在容器壁上淌走吸頭外壁多余的液體。
5. 移液器的放置
使用移液器完畢后,用大拇指按住吸頭推桿向下壓,安全退出吸頭后將其容量調(diào)到標(biāo)識的大值,然后將移液器懸掛在專用的移液器架上;長期不用時應(yīng)置于專用盒內(nèi)。
前進(jìn)移液法
按下移液操作桿至停點(diǎn)位置,然后緩慢松開按鈕回原點(diǎn);接著將移液操作桿按至停點(diǎn)位置排出液體,稍停片刻繼續(xù)將移液操作桿按至二停點(diǎn)位置排出殘余液體,后緩慢松開移液操作桿。
反向移液法
先按下按鈕至第二停點(diǎn)位置,慢慢松開移液操作桿回原點(diǎn),排出液體時將移液操作桿按至停點(diǎn)位置排出設(shè)置好體積的液體,繼續(xù)保持按住移液操作桿位于停
在調(diào)節(jié)移液器的過程中,轉(zhuǎn)動旋鈕不可太快,也不能超出其大或小量程,否則易導(dǎo)致量不準(zhǔn)確,并且易卡住內(nèi)部機(jī)械裝置而損壞移液器。
在裝配吸頭的過程中,用移液器反復(fù)強(qiáng)烈撞擊吸頭反而會擰不緊,長期如此操作,會導(dǎo)致移液器中零件松散,嚴(yán)重時會導(dǎo)致調(diào)節(jié)刻度的旋鈕卡住。
當(dāng)移液器吸頭里有液體時,切勿將移液器水平放置或倒置,以免液體倒流而腐蝕活塞彈簧。
對移液器進(jìn)行高溫消毒時,應(yīng)首先查閱所使用的移液器是否適合高溫消毒后在進(jìn)行處理。
移液器具有具有多種規(guī)格、多種體積變化,可滿足常規(guī)的需要,同時精度和誤差較高。采用獨(dú)特的單按鈕操作,防止氣溶膠污染,確保移液安全,移液器的下半部能夠高溫滅菌,只要將下半部輕輕旋開,即可卸下進(jìn)行滅菌。因此可以在進(jìn)行一些有生物危險性或無菌要求比較高的工作。移液管內(nèi)預(yù)裝有自封閉微孔過濾塞可有效阻止樣品氣霧進(jìn)入取液管內(nèi)造成損害或交差污染。移液器還可與塑料及兩種移液管相連接并用有搞腐蝕能力,適用于酸、堿及部分有機(jī)溶劑處理操作。定期校準(zhǔn)是保證移液器準(zhǔn)確性的重要手段
移液器使用方法(步驟)和保養(yǎng)維護(hù)注意事項:
1.設(shè)定移液體積:從大量程調(diào)節(jié)至小量程為正常調(diào)節(jié)方法,從小量程調(diào)節(jié)至大量程則應(yīng)先調(diào)至超過設(shè)定體積刻度,再回調(diào)至設(shè)定體積,以保證移液器的精確度。
2.裝配移液槍頭:將移液槍垂直插入槍頭,左右旋轉(zhuǎn)半圈,上緊即可。嚴(yán)禁移液器撞擊槍頭,長期這樣操作會導(dǎo)致移液器的零件損壞。
3.吸液及放液:槍頭尖端垂直浸入液面 3mm以下,吸液前槍頭先在液體中預(yù)潤洗三次左右,吸排液時慢吸慢放,排液時如果量很小槍頭尖端需貼在容器內(nèi)壁。
4.吸有液體的移液槍不要平放,槍頭內(nèi)的液體很容易回流到移液器內(nèi)污染腐蝕活塞等部件。
5.移液槍使用完畢后應(yīng)將刻度調(diào)至zui大,讓彈簧回復(fù)原形。
6.吸取液體時要緩慢平穩(wěn)地松開拇指,突然松開會將溶液吸入過快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣。
7.由于吸頭內(nèi)壁會殘留一層”液膜”產(chǎn)生誤差,吸頭需預(yù)先吸取一次樣品溶液,然后再正式移液。
8.可用分析天平稱量所取純水的重量并進(jìn)行計算的方法,來校正取液器,1mL 蒸餾水20℃時重0.9982g。
9.zui好定期清洗移液槍,可以用肥皂水或60%的異丙醇,再用蒸餾水清洗,自然晾干。
實際實驗中移液器在使用過程中因多種原因會造成偏差,定期校準(zhǔn)是保證其準(zhǔn)確性的重要手段。
1、化學(xué)消毒。 簡單說來,就是用酒精等擦拭移液器的外表面,然后晾干即可。這對于所有移液器品牌而言都應(yīng)該是可以做到的,否則其外殼的材質(zhì)也太差了! 2、紫外線消毒。 用紫外線照射移液器的表面,通過破壞細(xì)胞的DNA結(jié)構(gòu)來達(dá)到消毒的目的。紫外線消毒的時間取決于輻射強(qiáng)度和細(xì)菌對紫外線的抵抗力的強(qiáng)弱。多數(shù)品牌的移液器是可以用紫外線消毒的,但需要事先與供應(yīng)商進(jìn)行確認(rèn)。 3、移液器高溫高壓滅菌。 通常來說,移液器高溫高壓滅菌的工作條件是:102.9kPa(1.05kg/cm2),121℃,20分鐘。移液器的高溫高壓滅菌分為整支滅菌和半支滅菌,絕可以大多數(shù)品牌的移液器都可以半支滅菌,但是否能整支滅菌,使用者一定要與供應(yīng)商確認(rèn)。市場上,手動移液器等產(chǎn)品可以整支滅菌。不過這里需要提醒幾點(diǎn):第一,除了個別應(yīng)用,如傳染性病毒研究,多數(shù)客戶并不需要整支滅菌;第二,對于同品牌的產(chǎn)品,往往整支滅菌的貴于半支滅菌的,客戶需根據(jù)自己的需要作出決定。移液器是如何滅菌和消毒?