超微量分光光度計(jì)如何使用,有哪些注意事項(xiàng)?
一:超微量分光光度計(jì)是精密光學(xué)儀器,出廠前經(jīng)過(guò)精細(xì)的裝配和調(diào)試,如果能對(duì)儀器進(jìn)行恰當(dāng)?shù)木S護(hù)和保養(yǎng),不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性,也可以延長(zhǎng)儀器使用壽命。
二:超微量分光光度計(jì)常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
三:超微量分光光度計(jì)的工作原理是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門(mén) ,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。
四:超微量分光光度計(jì)是精密光學(xué)儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對(duì)保持儀器良好的性能和保證測(cè)試的準(zhǔn)確度有重要作用。下面分享一些超微量分光光度計(jì)不可不知的保養(yǎng)常識(shí)。
(1)儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計(jì)對(duì)工作環(huán)境的要求如下。
?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5~35℃.相對(duì)濕度不超過(guò)85%。
?、趦x器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,且避免強(qiáng)烈的振動(dòng)或持續(xù)的振動(dòng)。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強(qiáng),且應(yīng)避免直射日光的照射。
④電扇不宜直接向儀器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
?、荼M量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
⑥供給儀器的電源電壓為AC 220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器,以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場(chǎng)所使用。
(2)儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)
?、俟庠础9庠吹膲勖邢?,為了延長(zhǎng)光源使用壽命,在不使用儀器時(shí)不要開(kāi)光源燈,應(yīng)盡量減少開(kāi)關(guān)次數(shù)。在短時(shí)問(wèn)的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開(kāi)啟。儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)3h。若需長(zhǎng)時(shí)間使用,好間歇30min。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過(guò),要用無(wú)水乙醇擦拭。
?、趩紊?。單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開(kāi)。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng),不可用力過(guò)猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應(yīng)立即更換。
?、畚粘亍1仨氄_使用吸收池,應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
?、軝z測(cè)器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光,且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
?、莓?dāng)儀器停止工作時(shí),必須切斷電源。
?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污,在停止工作時(shí),應(yīng)蓋上防塵罩。
?、邇x器若暫時(shí)不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測(cè)定物質(zhì)對(duì)光的吸收,從而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器。在使用過(guò)程中常常會(huì)出現(xiàn)測(cè)量誤差,這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?下面小編為大家介紹分光光度計(jì)測(cè)量誤差產(chǎn)生原因。
1、復(fù)色光對(duì)比耳定律的偏離
比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光,但是精度再高的儀器,即使是雙單色器的分光光度計(jì),也只能獲得近乎單色的光,無(wú)法獲得純單色光,它仍然含有狹窄光通帶,具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。
固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm,可調(diào)狹縫的可以做到0、1nm;可見(jiàn)分光光度計(jì)帶寬6nm、snm,甚至十幾納米。
光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,但是,隨著光譜分辨率的提高,儀器的靈敏度降低,所以,選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí),可近似認(rèn)為符合比耳定律。
2、雜散光的影響
雜散光是指進(jìn)人檢測(cè)器的處于待測(cè)波長(zhǎng)光譜帶寬范圍外的其他波長(zhǎng)組分,它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。
產(chǎn)生原因有:
分光光度計(jì)的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長(zhǎng)處,由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度、檢測(cè)器靈敏度都較低,雜散光的影響更為顯著。
雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測(cè)量誤差,實(shí)際工作中,在定量分析時(shí),一般在吸收峰或其附近處測(cè)量樣品吸光度,如果在分析波長(zhǎng)處含有雜散光,這時(shí)樣品的透光率較小,而雜散光大部分透過(guò),使測(cè)量吸光度低于真實(shí)吸光度。
3、儀器噪聲對(duì)測(cè)t的影響
儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo),它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測(cè)量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào),掃描100%T和0%T線,可觀察到分光光度計(jì)的絕對(duì)噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會(huì)掩蓋較小的測(cè)量信號(hào),一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。
4、波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確度
樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的,如果,波長(zhǎng)誤差很大,測(cè)出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求,更應(yīng)引起足夠的重視。
國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為A級(jí)士0、6%,B級(jí)土1、0%。