色譜柱是化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)、常用的化工儀器之一，正確而有效的使用方法，不僅能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，也能確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
1、“保護(hù)柱”的使用
保護(hù)柱是很短的色譜柱，填裝和液相色譜柱相同的填料。正確使用”保護(hù)柱”，可以起到阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)的作用。從而達(dá)到延長(zhǎng)柱子壽命的效果。相反，如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)，可能會(huì)縮短色譜柱的使用壽命。例如，在保護(hù)柱使用過(guò)程中，如果污染達(dá)到一定程度而沒(méi)有及時(shí)更換，累積的雜物很可能會(huì)沖入色譜柱中，反而會(huì)造成色譜柱損壞。因此，在使用”保護(hù)柱”時(shí)，比較重要的是要知道什幺時(shí)候該換保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。
2、選擇高品質(zhì)的柱子
一般認(rèn)為同一廠牌、同一型號(hào)的柱子之間的品質(zhì)都相同，對(duì)品質(zhì)管理很嚴(yán)格的廠家而言，這說(shuō)法是成立的。但如果廠家品質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號(hào)的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時(shí)必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過(guò)后都會(huì)產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開(kāi)發(fā)新分析方法時(shí)，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會(huì)改變；如此一來(lái)，使用舊柱子開(kāi)發(fā)出來(lái)的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時(shí)。發(fā)生無(wú)法達(dá)到預(yù)定效果的情況?？偟恼f(shuō)。開(kāi)發(fā)新分析方法時(shí)要使用品質(zhì)好的新柱子；并且一支柱子建議使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長(zhǎng)。
3、定期沖洗色譜柱
一般柱子使用一段時(shí)間后總會(huì)有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)，而且這些雜質(zhì)不會(huì)隨著流動(dòng)相出來(lái)，會(huì)逐漸影響柱子的品質(zhì)。這些雜質(zhì)在后來(lái)的分析譜圖上出現(xiàn)。從而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡(jiǎn)單的解決方法是用較強(qiáng)的流動(dòng)相沖洗。而且每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時(shí)使用緩沖劑﹐建議用水來(lái)取代緩沖劑。先使用有機(jī)和水的混合溶液為流動(dòng)相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機(jī)溶劑沖洗。如果直接用100%有機(jī)溶劑沖洗的話，緩沖劑很可能會(huì)沉淀出來(lái)，而損壞柱子的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來(lái)沖洗基本就足夠了。建議將100%有機(jī)溶劑沖洗的條件加在分析實(shí)驗(yàn)程序完畢后，如此一來(lái)每天在開(kāi)機(jī)前都會(huì)用100%機(jī)溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再?zèng)_洗。打算使用反沖洗處理前，建議先參考柱子的保養(yǎng)說(shuō)明書。所以要真正保護(hù)柱子，使柱子的壽命延長(zhǎng)，建議是使用”保護(hù)柱”和定期沖洗柱子。
在日常分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
1、柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。
2、如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析，樣品種類不多，但分析次數(shù)比較多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)對(duì)柱內(nèi)填料產(chǎn)生沖擊力，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
5、使用柱溫箱時(shí)，應(yīng)注意在流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后才能開(kāi)啟柱溫箱升溫。
6、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
7、選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
9、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
10、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿色譜級(jí)的乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置一個(gè)晚上或更長(zhǎng)時(shí)間。
11、色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
12、在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般30分鐘以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在液相色譜分離系統(tǒng)中，色譜填料選擇的正確與否會(huì)直接影響到專業(yè)的液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于液相色譜填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍，所以我們?cè)谫?gòu)買液相色譜柱之前有必要對(duì)不同液相色譜填料進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單的認(rèn)識(shí)和了解。
第一、正相色譜硅膠基質(zhì)填料。
正相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團(tuán)組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較弱組合最先被色譜柱沖洗出來(lái)。而且正相色譜所使用的流動(dòng)相其極性要低于固定相，流動(dòng)相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
第二、反相色譜硅膠基質(zhì)填料。
反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì)，并與極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較強(qiáng)組合最先被色譜柱沖洗出來(lái)，而極性弱的組分則會(huì)更強(qiáng)的保留在柱子上。反向色譜的流動(dòng)相的極性相對(duì)較強(qiáng)，常配制有機(jī)緩沖液作為流動(dòng)相。目前較為常用的反相色譜填料有C4（B）、C8（MOS）以及C18（ODS）等。
第三、聚合物填料。
這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點(diǎn)是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對(duì)較廣，且疏水性很強(qiáng)，但它的柱效相對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。
第四、其他無(wú)機(jī)填料。
如石墨化碳對(duì)于酸堿度和溫度沒(méi)用嚴(yán)格的限制范圍，一般可對(duì)一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進(jìn)行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無(wú)機(jī)填料的應(yīng)用。
總而言之，如果我們能夠全面系統(tǒng)的了解一下液相色譜柱填料的分類及特點(diǎn)，那么我們?cè)谶x擇購(gòu)買一流的色譜柱時(shí)就可以在一個(gè)相對(duì)較小的范圍內(nèi)順利找到自己所需要的產(chǎn)品。這樣我們就可以在節(jié)省選擇購(gòu)買時(shí)間的同時(shí)，也能快速買到令自己滿意的色譜柱。
449717568
