新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟：
1. 開啟色譜柱的包裝盒，查看色譜的測試報告；
2. 根據(jù)色譜柱身上箭頭標(biāo)明的流向先將色譜柱入口端連入系統(tǒng)，柱出口端先不要連接；
3. 0.1 mL/min 流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2 min內(nèi)將流速升至0.5 mL/min;
4. 當(dāng)溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上；
5. 重啟流速，然后在0.1 mL/min 流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱30 min，在10 min內(nèi)將流速升至1.0 mL/min沖洗30 min。
6. 參考柱效測試報告中的方法，30 min內(nèi)將流動相梯度轉(zhuǎn)換到柱效測試的流動相條件，然后使用5-10倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至壓力與基線穩(wěn)定。
7. 測試柱效。如果柱效與出廠報告偏移過大，或峰形拖尾就需要進(jìn)行故障排查或聯(lián)系上海易創(chuàng)分析儀器有限公司。
反相色譜柱的清洗與再生：
1. 發(fā)現(xiàn)柱壓升高，色譜峰出現(xiàn)嚴(yán)重拖尾、肩峰甚至峰分岔，或分離度降低，有可能是樣品溶解度、色譜柱溫度、堿性化合物干擾，也很有可能是色譜柱受污染，可以采取以下措施：
2. 如系統(tǒng)有連接在線過濾器或保護(hù)柱，首先排查在線過濾器與保護(hù)柱，可能需要更新。
3. 使用純有機(jī)相低流速沖洗過夜。（如有使用緩沖鹽，應(yīng)使用不含緩沖液的流動相沖洗1h，然后再梯度過渡到純有機(jī)相低流速沖洗過夜。）
4. 如有機(jī)相清洗不能解決問題，可采用如下方法進(jìn)行色譜柱的清洗和再生。根據(jù)樣品的性質(zhì)以及你了解的污染物性質(zhì)選擇清洗方法，用20-30倍柱體積（4.6*250 mm分析色譜柱大約80-120 mL溶劑清洗，流動相溫度升至30-50 oC，然后再重復(fù)步驟3的方法。
5. 氨基柱
反相色譜柱的保存：
1. 反相色譜柱應(yīng)保存于純有機(jī)相中（如乙腈或甲醇）。色譜柱使用于高溫或極端pH條件下，或停用超過48小時，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行簡單的清洗過程；
2. 清洗首先用不含緩沖鹽的流動相沖洗20-30倍柱體積, 然后30 min內(nèi)梯度過渡到純有機(jī)相，再用純有機(jī)相沖洗20-30倍柱體積；
3. 后使用原配的柱堵頭擰緊，確保堵頭溶劑不會揮發(fā)。若是氨基柱則應(yīng)該在步驟2中添加0.1%的氨水，有利于延長氨基柱的壽命；
糖檢測色譜柱特點(diǎn)：
1.柱壽命更長：雜化鍵和相技術(shù)使得這款糖柱兼有硅膠柱的耐壓性與聚合物柱的酸堿耐受性。
2.基線更穩(wěn)定：與常規(guī)的用于分析糖的硅膠氨基柱比較，即使使用梯度洗脫也沒有基線漂移問題。
3.可兼容使用在梯度洗脫條件下的ELSD檢測。
糖檢測色譜柱使用時注意事項(xiàng)：
1.為避免管路中的有機(jī)溶劑和氣泡進(jìn)入糖檢測色譜柱，先用水沖洗整個色譜系統(tǒng),然后才能接入糖檢測色譜柱。
2.不要讓有機(jī)溶劑進(jìn)入柱中，否則會使填料脫水，導(dǎo)致柱床損壞，要小流速開啟泵，不要快速加大流速，以防止壓力迅猛升高而導(dǎo)致柱床損壞。15mm的柱子流速不要超過3ml/min。
3.每次使用后務(wù)必用蒸餾水沖洗干凈將含鹽的流動相置換干凈，若較長時間不用請按保存方法保存。
糖檢測色譜柱保存方法：
1.將糖檢測色譜柱用蒸餾水沖凈后充上0.02%-0.05%的疊氮鈉水溶液封存,或三氯丁醇(0.015%)苯基汞代鹽(0.001-0.01%)將糖檢測色譜柱封閉后低溫保存(溫度在5℃左右)在冰箱。
2.再次使用時,用蒸餾水將保護(hù)溶液沖洗掉即可使用。
3.如果第二天還要使用也要從系統(tǒng)中取下，將柱封閉后存于4~8度的冰箱中冷藏。
一、去除樣品和流動相中的固體顆粒
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因?yàn)楹Y板的堵塞會引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。
二、流動相的pH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)
由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其pH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由于流動相的pH控制不當(dāng)而對色譜柱造成的損害，通常很難使色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對待，嚴(yán)格控制流動相的pH值。
三、使用保護(hù)柱或在線過濾器
樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能完全消除固體顆粒物質(zhì)，因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動相進(jìn)行過濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器。
如果確認(rèn)色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進(jìn)行補(bǔ)救：
1、先在色譜柱前加上保護(hù)柱或在線過濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器，然后反向使用。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意：過渡流動相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動相相同，區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法：
1)方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2)方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應(yīng)，需要一定的時間才會體現(xiàn)出來，但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護(hù)清洗色譜柱。
清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽。
2、使用過緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽。
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