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液相色譜儀色譜柱使用時需要注意哪些細節(jié) 液相色譜如何做好保養(yǎng)

時間:2020-07-12    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
       在液相色譜儀的日常分離分析工作中,其色譜柱的正確使用和維護十分重要,色譜柱使用是否得當,直接影響色譜柱的壽命及液相色譜儀的使用效果,在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護儀器。
  1、柱子在裝卸、更換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,以免柱床產(chǎn)生空隙。
  2、如果儀器用來做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根 柱,這樣有助于延長柱子的壽命。
  3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
  4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/div>
  5、如使用柱溫控制裝置時,應(yīng)注意在通人流動相后才能升溫。
  6、一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
  7、選擇使用適宜的流動相,以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
  8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
  9、保存液相色譜儀的色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。

安捷倫液相色譜儀的日常維護及保養(yǎng)

1、手動進樣器:
平時應(yīng)該注意使用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進樣分析狀態(tài)清洗;如果出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染,一般要申請維修或更換配件。
2、排液閥:
此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損,可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
3、單向閥:
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取,則可能是單向閥出現(xiàn)問題,卸下用異丙醇超聲波清洗,清洗時須按其安裝的方向放置在小燒杯中,切記不可與安裝方向倒置超洗!
4、工作站:
出現(xiàn)死機可重起計算機;不正常運行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機上重新插拔接口、重新安裝軟件。
5、過濾器:(安捷倫液相色譜儀)
當色譜峰出現(xiàn)異常情況時,有可能是此部件被污染, 拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、吸濾頭:
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。
7、流動相的抽作要求:
液相級色譜醇,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾;
流動相脫氣至關(guān)重要(可采用抽濾,超聲波脫氣等方法)
8、流通池:
在色譜峰不正常時會可能是此部件補污染??刹鹦逗笕〕銎渲械膲|片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進行操作或申請維修)。
9、泵頭:
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)
泵壓不穩(wěn):
1、泵頭有氣泡——流動相脫氣/大流量沖洗泵/用注射器抽取流動動相
2、單向閥故障——清洗
若上述操作仍不能解決,可用異丙醇沖洗流動(無色譜柱沖洗,由手動進樣器直接進檢測器),流量為3-4ml/min,沖洗50分鐘左右,然后重新安裝色譜柱,更換流動相平衡,如此再不能解決泵壓波動故障,可申請更換配件。
10.漏液處理:(安捷倫液相色譜儀)
C18柱不能進蛋白樣品、血樣,生物樣品。
要注意柱子的PH值范圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。
長時間不用儀器,應(yīng)該將柱子取上用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機相(如甲醇)保存,因為純水易長霉。
流路堵塞問題:堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查,并清洗。清洗方法:①以民丙醇作溶劑沖洗②放在異丙醇中超聲波清洗③用10%稀硝酸清洗
11.緩沖鹽的使用:
流動相含有鹽分時,做完實驗后一定要進行流路沖洗;
首先用水沖洗,打開排液閥用PURG鍵轉(zhuǎn)換出原有含鹽的流動相,然后關(guān)閉排液閥打開泵沖洗全部流路45分鐘以上,如此更換流動相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘(此步驟一般可省去,根據(jù)實驗而論),zui后更換純甲醇沖洗全部流路45分鐘以上。
12.泵頭沖洗;
用備件中的針頭和針管分別用蒸餾水和純甲醇沖洗3-5ml。
如流動相不含鹽,可對機器定期進行簡單的沖洗維護,根據(jù)實驗多少而定。
手動進樣器沖洗;
同樣用備件中的針管和專用沖洗針頭對手動進樣器的裝載狀態(tài)和進樣狀態(tài)分別進行沖洗3-4ml的蒸餾水,然后再沖洗3-4ml的純甲醇。確保每次做完實驗,所有流路中充滿純甲醇!

高效液相色譜儀操作步驟:

1). 過濾流動相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜.

2). 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

3). 打開hplc工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統(tǒng)。

4). 進入hplc控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。

5). 有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10 ml/min。

6). 調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000。點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。

7). 設(shè)計走樣方法。點擊file,選取se-lect users and methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊new method。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據(jù)需要而不同。選完后,點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括:a.進樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;d.走樣時間,隨不同的樣品而不同。

8). 進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。

9). 關(guān)機時,先關(guān)計算機,再關(guān)液相色譜。

10). 填寫登記本,由負責(zé)人簽字。注意事項:

11). 流動相均需色譜純度,水用20m的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。12). 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要讓液體過柱子。

13). 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。

14). 壓力不能太大,可以不要超過2000 psi。



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