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分光光度計(jì)的測定條件如何選擇 光度計(jì)常見問題解決方法

時間:2020-07-12    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
       分光光度計(jì)可滿足各種應(yīng)用的要求,可用在生物研究、生物工業(yè)、藥物分析、制藥、教學(xué)研究、 環(huán)保、食品衛(wèi)生、臨床檢驗(yàn)、衛(wèi)生防疫等領(lǐng)域。
  分光光度計(jì)的光源燈采用6V/10W插入式鎢鹵素?zé)?,更換時應(yīng)先切斷電源,取出損壞的鎢鹵素?zé)?,換上新燈,將儀器的波長置于500nm處,開啟儀器電源,移動燈上、下、左、右位置,直到成象在進(jìn)狹縫上。在T狀態(tài),不調(diào)節(jié)100%鍵,(蓋上樣品室蓋)觀察顯示讀數(shù),調(diào)整燈使顯示讀數(shù)為高即可。
  分光光度計(jì)的測定條件的選擇:
  一、入射光波長的選擇
  在大吸收波長處測定吸光度不僅能獲得高的靈敏度,而且還能減少由非單色光引起的對朗伯-比爾定律的偏離。因此在分光光度計(jì)的分光光度法測定中一般選擇大吸收波長為入射波長。
  二、參比溶液的選擇
  在實(shí)驗(yàn)中,要選擇合適的空白溶液作為參比溶液來調(diào)節(jié)分光光度計(jì)的零點(diǎn),以便消除顯色溶液中其他有色物質(zhì)的干擾,抵消吸收池和試劑對入射光的影響。根據(jù)試樣溶液的性質(zhì),選擇合適組分的參比溶液很重要。
  三、吸光度范圍選擇與控制
  任何分光光度計(jì)都有一定的測量誤差,測量誤差的來源主要是光源的發(fā)光強(qiáng)度不穩(wěn)定法,光電效應(yīng)的非線性,電位計(jì)的非線性,雜散光的影響,單色器的光不純等因素,對于一臺固定的分光光度計(jì)來說,以上因素都是固定的,也就是說它的誤差具有一定穩(wěn)定性。
  四、比色皿的使用
  選擇適宜規(guī)格的比色皿,盡量把吸光度值調(diào)整在0.2~0.8之間。同一實(shí)驗(yàn)使用同一規(guī)格的同一套比色皿,以減少測量誤差,所以用普通分光光度法不適用于高含量或較低含量物質(zhì)的測定。
  分光光度計(jì)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室分析儀器,面對眾多品牌和型號的分光光度計(jì),用戶該應(yīng)適宜選擇合適的分光光度計(jì)。盡管分光光度計(jì)種類繁多,但不外乎簡易型、中檔型和型三大類。



    紫外分光光度計(jì)一般都隨機(jī)附有一只塑料布罩,不使用時用其罩住整個儀器,這是很好的防塵手段。但發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室里不用附來塑料布罩,而是自己用一塊普通布或做成布罩來覆蓋儀器,防塵效果不如塑料布罩理想。另外,在塑料布罩只放入數(shù)袋防潮硅膠,也能更好起到延長防潮的功效。在防潮時,如果紫外分光光度計(jì)設(shè)有防潮干燥筒的,應(yīng)經(jīng)常檢查,發(fā)現(xiàn)變色立即更換新的或加以烘干再用。
    長期停用的紫外分光光度計(jì),要定期開機(jī)除潮,如每隔一個月通電預(yù)熱半小時,以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài),并且維持電子元件的性能。
    紫外分光光度計(jì)對溶液進(jìn)行測定時,首先需要選擇合適的測量波長。選擇的依據(jù)是該被測溶液的吸收曲線。在一般情況下,我們總是選擇最大吸收波長作為測量波長,這樣可以提高靈敏度。而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有干擾存在,就不能選最大吸收波長,而必須在保證有一定靈敏度的情況下,選擇吸收曲線中的其它波長進(jìn)行測定(曲線較平坦處對應(yīng)的波長),以消除干擾。繪制吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。
    吸光度范圍:
    試樣在不同吸光度時,濃度的相對誤差不同,一般選擇0.2一0.8之間,濃度相對誤差較小,可以通過改變吸收池厚度、檢測波長或待測溶液濃度,使吸光度讀數(shù)在適宜范圍內(nèi)。
    狹縫寬度:
    狹縫寬度不僅影響光譜的純度,也影響吸光度值,在定量分析時,為了得到足夠的測量信號,應(yīng)采用較大狹縫。在定性分析時,為了提高分辨率,應(yīng)采用較小狹縫,以獲得精細(xì)的光譜結(jié)構(gòu)。





 一.光源部分: 


(1)故障:鎢燈不亮; 

原因:鎢燈燈絲燒斷(此種原因幾率高); 

檢查:鎢燈兩端有工作電壓,但燈不亮;取下鎢燈用萬用表電阻檔檢測。 

處置:更換新鎢燈; 

(2)故障:氘燈不亮; 

原因:氘燈起輝電路故障; 

檢查:氘燈在起輝的過程中,一般是燈絲先要預(yù)熱數(shù)秒鐘,然后燈的陽極與陰極間才可起輝放電,如果燈在起輝的開始瞬間燈內(nèi)閃動一下或連續(xù)閃動,并且更換新的氘燈后依然如此,有可能是起輝電路有故障,燈電流調(diào)整用的大功率晶體管損壞的幾率大。 

處置:需要專業(yè)人士修理; 

二.信號部分: 

(1)故障:沒有任何檢測信號輸出; 

原因:沒有任何光束照射到樣品室內(nèi); 

檢查:將波長設(shè)定為530nm,狹縫盡量開到寬檔位,在黑暗的環(huán)境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處,觀察白紙上有無綠光斑影像; 

處置:檢查光源鏡是否轉(zhuǎn)到位?雙光束儀器的切光電機(jī)是否轉(zhuǎn)動了(耳朵可以聽見電機(jī)轉(zhuǎn)動的聲音)? 

(2)故障:樣品室內(nèi)無任何物品的情況下,全波長范圍內(nèi)基線噪聲大; 

原因:光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品; 

檢查:觀察光源是否照射到入射狹縫的中央?石英窗上有無污染物? 

處置:重新調(diào)整光源鏡的位置,用乙醇清洗石英窗; 

(3)故障:樣品室內(nèi)無任何物品的情況下,僅僅是紫外區(qū)的基線噪聲大; 

原因:氘燈老化、光學(xué)系統(tǒng)的反光鏡表面劣化、濾光片出現(xiàn)結(jié)晶物; 

檢查:可見區(qū)的基線較為平坦,斷電后打開儀器的單色器及上蓋,肉眼可以觀察到光柵、反光鏡表面有一層白色霧狀物覆蓋在上面;如果光學(xué)系統(tǒng)正常,大的可能是氘燈老化,可以通過能量檢查或更換新燈方法加以判斷; 

處置:更換氘燈、用火棉膠粘取鏡面上的污物或用研磨膏研磨濾光片(注意:此種技巧需要有一定維修經(jīng)驗(yàn)者來實(shí)施); 

(4)故障:樣品室放入空白后做基線記憶,噪聲較大,紫外區(qū)尤甚; 

原因:比色皿表面或內(nèi)壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白樣品對紫外光譜的吸收太強(qiáng)烈,使放大器超出了校正范圍; 

檢查:將波長設(shè)定為250nm,先在不放任何物品的狀態(tài)下調(diào)零,然后將空比色皿插入樣品道一側(cè),此時吸光值應(yīng)小于0.07Abs;如果大于此值,有可能是比色皿不干凈或使用了玻璃比色皿;同樣方法也可判斷空白溶液的吸光值大小; 

處置:清洗比色皿,更換空白溶液; 

(5)故障:吸光值結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值(常見); 

原因:沒做空白記憶、樣品的吸光值小于空白參比液; 

檢查:將參比液與樣品液調(diào)換位置便知; 

處置:做空白記憶、調(diào)換參比液或用參比液配置樣品溶液; 

(6)故障:樣品信號重現(xiàn)性不良; 

原因:排除儀器本身的原因外,大的可能是樣品溶液不均勻所致;在簡易的單光束儀器中,樣品池架一般為推拉式的,有時重復(fù)推拉不在同一個位置上; 

檢查:更換一種穩(wěn)定的試樣判定; 

處置:采取正確的試樣配置手段;修理推拉式樣品架的定位碰珠; 

(7)故障:做基線掃描或樣品掃描時,基線或信號有一個大的負(fù)脈沖; 

原因:掃描速度設(shè)置得過快,信號在讀取時,誤將濾光片或光源鏡的切換當(dāng)做信號讀取了; 

檢查:改變掃描速度; 

(8)故障:做基線掃描或樣品掃描時,基線或信號有一個長時間段的負(fù)值或滿屏大噪聲; 

原因:濾光片飼服電機(jī)“失步”,造成檔位錯位,國產(chǎn)電機(jī)尤甚; 

檢查:重新開機(jī)有可能回復(fù),或打開單色器對照波長與濾光片的相對位置來檢查(注意:打開單色器時要保護(hù)檢測器不被強(qiáng)光刺激); 

處置:更換飼服電機(jī); 

(9)故障:樣品出峰位置不對; 

原因:波長傳動機(jī)構(gòu)產(chǎn)生位移; 

檢查:通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判斷波長是否準(zhǔn)確; 

處置:對于儀器而言處理手段相對簡單,使用儀器固有的自動校正功能即可;而對于相對簡單的儀器,這種調(diào)整則需要專業(yè)人員來進(jìn)行了; 

(10)故障:信號的分辨率不夠,具體表現(xiàn)是:本應(yīng)疊加在某一大峰上的小峰無法觀察到; 

原因:狹縫設(shè)置過窄而掃描速度過快,造成檢測器響應(yīng)速度跟不上,從而失去應(yīng)測到的信號;按常理,一定的狹縫寬度要對應(yīng)一定范圍的掃描速度;或者狹縫設(shè)置得過寬,使儀器的分辨率下降,將小峰融合在大峰里了。 

檢查:放慢掃描速度看一看或?qū)ⅹM縫設(shè)窄; 

處置:將掃描速度、狹縫寬窄、時間常數(shù)三者擬合成一個優(yōu)化的條件; 

(11)故障:當(dāng)儀器波長固定在某個波長下時,吸光值信號上下擺動,特別是測量模式轉(zhuǎn)換為按鍵開關(guān)式的簡易儀器; 

原因:開關(guān)觸點(diǎn)因長期氧化所致造成接觸不良; 

檢查:用手加重力量按琴鍵時,吸光值隨之變化; 

處置:用金屬活化劑清洗按鍵觸點(diǎn)即可; 

(12)故障:儀器零點(diǎn)飄忽不定,主要反映在簡易儀器上; 

原因:在簡易儀器中,零點(diǎn)往往是通過電位器來調(diào)整,這種電位器一般是炭膜電阻制作的,使用久了往往造成接觸不良; 

處置:更換電位器; 

還有一點(diǎn)補(bǔ)充一下,如果是PC連接UV時,同志們一定注意接口板別不小心被擊穿,一定要關(guān)機(jī)后拔插.若可見部分穩(wěn)定性不好,有可能是鎢燈的供電電壓不穩(wěn),一般鎢燈電源是穩(wěn)壓電路。 
 


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