通過預(yù)設(shè)的獲取模式文件進(jìn)行樣品分析
1．從蘋果標(biāo)志中選擇CELLQUEST，新視窗出現(xiàn)后從File指令欄中選擇Open，打開預(yù)設(shè)的獲取模式文件。
2．從屏幕上方Acquire指令欄中，選取Connect to Cytometer進(jìn)行電腦和儀器的連機(jī)。將出現(xiàn)的Acquisiton
Control對(duì)話框移至合適位置。
3．從Cytometer指令欄中選取Instrument Settings，在其對(duì)話框中選擇Open以調(diào)出以前存儲(chǔ)的相同實(shí)驗(yàn)的儀器設(shè)定，按Set 確定。
4．在Acquire指令欄中，選擇Acquisition&Storage決定儲(chǔ)存的細(xì)胞數(shù)，參數(shù)，信號(hào)道數(shù)。其中Resolution在做細(xì)胞表面標(biāo)志時(shí)選擇256，做DNA時(shí)選擇1024。Parameter
Saved…則根據(jù)不同的檢測(cè)對(duì)象選擇不同的參數(shù)。
5．在Acquire指令欄中，選擇Parameter
Description，以決定文件存儲(chǔ)位置(folder)，文件名稱(file)，樣品代號(hào)以及各種參數(shù)的標(biāo)記(panel)，即安排tube1，2，3…的檢測(cè)參數(shù)。一般本儀器獲取的數(shù)據(jù)按照檢測(cè)對(duì)象的不同分別儲(chǔ)存于FACStation
G3BD Applications CELLQuest IMM 和DNA 文件夾中。文件根據(jù)日期命名。
6．在Cytometer指令欄中，選擇Counters，將此對(duì)話框移至合適位置，以便于隨時(shí)觀察events計(jì)數(shù)。
7．將樣品試管放至檢測(cè)區(qū)，在Acquire Control對(duì)話框中選取Acquire以啟動(dòng)樣品分析測(cè)定。
8．微調(diào)儀器設(shè)定，待細(xì)胞群分布合適后選擇Acquire Control對(duì)話框中Pause, Abort,
去除Setup前的“?”，開始正式獲取信號(hào)，存儲(chǔ)數(shù)據(jù)。
9．當(dāng)一定數(shù)目的細(xì)胞被測(cè)定后，獲取會(huì)自動(dòng)停止，并會(huì)自動(dòng)存儲(chǔ)數(shù)據(jù)。重復(fù)步驟7，繼續(xù)分析下一個(gè)樣品，直到所有的樣品數(shù)據(jù)分析完畢。
?當(dāng)所有樣品分析分析完畢，即換上三蒸水，并將流式細(xì)胞儀置于“STANDBY”狀態(tài)，以保護(hù)激光管。
五．關(guān)機(jī)程序：
1．從File中選擇Quit, 退出軟件，選擇Don’t Save至蘋果屏幕。
2．用4ml 1：10稀釋的漂白水作樣品，將樣品置于旁位(vacuum is on)，以外管吸去約2ml，在將樣品架置于中位(vacuum is
off)，再HIGH RUN 5分鐘(內(nèi)管吸去2ml)。
3．改用三蒸水4ml作樣品,同上處理。
4．按Prime三次。
5．此時(shí)儀器自動(dòng)轉(zhuǎn)為STANDBY狀態(tài)，換2ml三蒸水。必須在儀器處于“STANDBY”狀態(tài)
10分鐘后再依次關(guān)掉計(jì)算機(jī)、打印機(jī)、主機(jī)、穩(wěn)壓電源，以延長激光管壽命，并確保應(yīng)用軟件的正常運(yùn)行。
6．填寫使用登記表。
流式細(xì)胞儀在醫(yī)學(xué)應(yīng)用非常廣泛，是一種能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理的儀器，并且能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行必要的分析，所以在醫(yī)學(xué)生的應(yīng)用非常的多。下面介紹一下流式細(xì)胞儀的具體應(yīng)用： 流式細(xì)胞儀的應(yīng)用 1、DNA倍體分析 DNA分析是流式細(xì)胞儀最初且是現(xiàn)在應(yīng)用廣泛檢測(cè)項(xiàng)目。由于惡性細(xì)胞DNA含量通常與正常細(xì)胞不同，存在異倍體細(xì)胞，所以現(xiàn)有很研究評(píng)價(jià)異倍體細(xì)胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測(cè)還可提供細(xì)胞周期方面的信息，這在細(xì)胞生物學(xué)中運(yùn)用很廣泛。特別地，它可表示出細(xì)胞毒性藥物對(duì)細(xì)胞作用過程。這些DNA檢測(cè)還可與細(xì)胞表面標(biāo)志物標(biāo)記同時(shí)進(jìn)行，這樣在細(xì)胞混合培養(yǎng)中，可通常追蹤表達(dá)特異標(biāo)志物的細(xì)胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光，常用的染料為PI，DAPI?！ ≡谠擃I(lǐng)域Partec公司的 CyFlow PA是一枝獨(dú)秀?！ ?、細(xì)胞生存能力實(shí)驗(yàn) 使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合，后因細(xì)胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異，故可評(píng)估細(xì)胞的活性度。 3、計(jì)數(shù)外周血中檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞 使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合，結(jié)合系數(shù)高達(dá)3000，故具有很好的性價(jià)比?！ ?、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細(xì)胞計(jì)數(shù)，臨床上用于骨髓移植前干細(xì)胞數(shù)理的測(cè)定。使用標(biāo)準(zhǔn)ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用FITC通道，PE標(biāo)記CD34抗體，PE-CY5標(biāo)記CD45抗體?！ ?、交叉淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)識(shí)別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細(xì)胞之間是否存在反應(yīng)有著重要臨床意義，因?yàn)檫@種反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細(xì)胞缺乏癥。流式細(xì)胞儀可檢測(cè)全血樣本與血清孵育后粒細(xì)胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標(biāo)記人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記粒細(xì)胞表面標(biāo)志物、PE-CY5標(biāo)記HLA抗體?！ ?、血小板自身抗體檢測(cè) 血小板自身抗體識(shí)別人血小板抗原，會(huì)引起各種臨床相關(guān)癥狀，如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細(xì)胞可快速準(zhǔn)確地檢測(cè)血小板自身抗體。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識(shí)別血小板抗體?！ ?、移植交叉配型 原細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，主要用于避免移植物超急性排拆反應(yīng)。流式細(xì)胞儀用于監(jiān)測(cè)T或B細(xì)胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊，作為HLA配型前的預(yù)實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞儀因其高精確性已成為該領(lǐng)域內(nèi)的金標(biāo)準(zhǔn)。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識(shí)別T細(xì)胞CD3或B細(xì)胞CD29抗體。 8、檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)抗原或細(xì)胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng)淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo)CD69可用來檢測(cè)免疫治療效果。流式細(xì)胞使用三色分析可監(jiān)測(cè)淋巴細(xì)胞各亞群活化情況：FITC標(biāo)記的CD3抗體、PE標(biāo)記的CD8抗體、PE-CY5標(biāo)記的CD69抗體?！ ?、細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測(cè) 核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細(xì)胞增殖分裂狀況，在評(píng)估腫瘤預(yù)后有重要意義。為些標(biāo)志物的檢測(cè)一般同細(xì)胞表面標(biāo)志物同時(shí)檢測(cè)。FITC標(biāo)記PCNA或Ki67或BrdUrd，PE或（并）PE-CY5標(biāo)記細(xì)胞表面標(biāo)志物。 10、染色體分析 流式細(xì)胞儀染色分析運(yùn)用兩種特異性染料：Hoechest33258與核苷酸AT結(jié)合；Chromomycin A3與GC相結(jié)合。從而在雙參數(shù)坐標(biāo)上根據(jù)染色體ATCG含量的不同識(shí)別各種染色體。平時(shí)進(jìn)行的染色體分析耗時(shí)且需要操作者極具經(jīng)驗(yàn)，而用流式細(xì)胞儀時(shí)可快速地識(shí)別出異常染色體，如加配分選系統(tǒng)可將這些異常染色體分選出來作進(jìn)一步分析。
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