、準(zhǔn)備好工具和所需部件。工具包括扳手、超聲清洗器、密封圈安靜工具、新密封圈。用水-甲醇沖洗泵，拆開進(jìn)出口管道，在泵頭和單向閥上標(biāo)出液流方向。
第二、將柱塞桿縮至小，松開泵頭的收緊螺釘，小心托住泵頭。操作時(shí)要注意處處以平衡的動(dòng)作慢慢退出泵頭，切不可搖動(dòng)或上下左右擺動(dòng)泵頭。
第三、從密封圈孔中輕輕拔出舊密封圈，注意不要化泵頭內(nèi)壁，要毫不猶豫地隨即扔掉舊密封圈。
第四、將泵頭和新密封圈分別放入甲醇中超聲清洗，同時(shí)用無纖維紙擦洗柱塞桿。察看柱塞桿上有無劃痕，如有劃痕應(yīng)換新柱塞桿然后再安裝密封圈，
第五、安裝新密封圈。這一步要用專門的安裝工具，切不可粗心大意，避免損壞密封圈。
第六、重新裝上泵頭。先在柱塞桿上滴幾滴甲醇以濕潤(rùn)，滑動(dòng)泵頭到位。千萬不能搖動(dòng)或擺動(dòng)，以防柱塞桿在這一步操作時(shí)折斷。平衡地上緊固定螺絲，接上進(jìn)液管道。
后、打脫氣甲醇到泵腔中，不斷用紙巾從泵出口處吸去流出的液體，等到無氣泡一處再接上輸出管道，打開放空閥，繼續(xù)抽20mL甲醇趕走氣泡后，換成需要使用的流動(dòng)相。
液相色譜儀檢測(cè)器阻塞的現(xiàn)象有：系統(tǒng)壓力增高，松開檢測(cè)器進(jìn)口的接頭壓力降至正常水平。檢測(cè)器部分有三處易發(fā)生阻塞，即進(jìn)口管路、流通池和出口管路。因組設(shè)造成壓力顯著增高，雖然用一般的凈化方法去掉阻塞可能不奏效，但值得一試。如用注射器回抽池中的溶劑受到很大阻力，說明阻塞相當(dāng)嚴(yán)重。若是檢測(cè)儀器廠商標(biāo)明池能耐高壓，可用泵反沖，這樣常可去掉阻塞壓力，注意壓力不要超過6MPa~7MPa。標(biāo)準(zhǔn)池一般耐壓在3~5MPa左右，不可用此法?！ ∮靡陨戏椒ㄔ囼?yàn)不能成功疏通檢測(cè)器通道阻塞時(shí)，可將流通池從檢測(cè)器中拆下來，將進(jìn)口管路卸下，用泵方向沖洗。然后再?zèng)_洗出口管路。如果進(jìn)出口管路都是通暢的，那么就是流通池本身阻塞?！ ∵M(jìn)口管路是最易發(fā)生堵塞的地方，用小徑的管路可以擋住進(jìn)入檢測(cè)器的微粒。但有下列情形者在進(jìn)口處可發(fā)生堵塞： 1、自己填裝的柱在出口處留下填料微粒； 2、修復(fù)柱時(shí)逆向反沖時(shí)間不夠就接到檢測(cè)器上； 3、逆向反沖時(shí)原柱頭密封性能不好，填料漏出?！ ∪绻氯h(huán)發(fā)生，應(yīng)在柱和檢測(cè)器之間裝一個(gè)沒有死體積的在線過濾器。拆下進(jìn)口管路反接到泵上反沖，可以疏通堵塞。 對(duì)一些頑固性阻塞而又不能從池上拆開的管路，可以從管路進(jìn)口處切掉大約1~2cm長(zhǎng)的管子。當(dāng)然這是一種無可奈何的選擇，因?yàn)槊看尾僮骱髸?huì)使得管子變短，還涉及到換刃環(huán)接頭等，還可能會(huì)因?yàn)榍锌诓黄秸?、密封不?yán)等造成滲漏?！ ∪粲靡陨戏椒ǘ疾荒苁柰ㄊ柰ㄟM(jìn)口管路，應(yīng)考慮更換新管子或請(qǐng)廠商修理。出口管路阻塞，也可參照上述方法進(jìn)行處理。
液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。
柱管：
多用不銹鋼制成，若果使用時(shí)柱壓不高于70 kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。
壓帽：
即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。
密封環(huán)：
位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。
色譜柱使用前注意事項(xiàng)。
色譜柱在使用前，最hao進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。
在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是最jia條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
但要注意：
柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、最hao使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm或0.22?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)
c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，最hao使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。
除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動(dòng)相流速的選擇
因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。
對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最jia柱效，最hao使用最jia流速。
對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
當(dāng)選用最jia流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。
可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流動(dòng)相最hao在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過夜。最hao加入die氮化鈉，防止細(xì)菌生長(zhǎng)。
b．流動(dòng)相要求使用0.45 μm或0.22m濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。
c．使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
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