液相色譜技術(shù)在各個(gè)行業(yè)中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛,選購(gòu)合適的液相色譜分析柱對(duì)獲得理想的分離效果至關(guān)重要。本文將從液相色譜柱的類型、填充料種類、顆粒大小、孔徑大小等方面,詳細(xì)闡述合理選購(gòu)液相色譜柱的方法和技巧。
一、根據(jù)分析目的選擇液相色譜柱類型
常見(jiàn)的液相色譜柱類型有正相色譜柱、反相色譜柱、離子交換色譜柱、規(guī)模色譜柱、親和色譜柱等。選擇柱類型的關(guān)鍵在于分析目的和樣品性質(zhì)。
1、正相色譜柱:用于分離極性組分,常用的填料有硅膠、氧化鋁等。
2、反相色譜柱:用于分離非極性組分,填料為反相組分,如C18、C8等。
3、離子交換色譜柱:用于分離帶電荷的化合物,如氨基酸、蛋白質(zhì)等。
4、規(guī)模色譜柱:根據(jù)分子大小進(jìn)行分離,填料為凝膠材料。
5、親和色譜柱:利用生物特異性相互作用進(jìn)行分離。
二、選擇合適的填料
色譜柱填料直接決定了分離效果。常見(jiàn)的填料有硅膠、氧化鋁、C18、C8等。
1、硅膠:極性填料,用于正相分離。硅膠種類繁多,需根據(jù)樣品極性選擇合適的硅膠。
2、氧化鋁:與硅膠類似,也用于正相分離。相比硅膠更 mechanically強(qiáng),耐用性更好。
3、C18:非極性強(qiáng)的長(zhǎng)鏈烷基填料,用于反相分離。C18是最常用的反相填料。
4、C8:中等非極性的填料,介于C18和硅膠之間,可根據(jù)需要選擇。
三、填料顆粒大小的選擇
填料顆粒越小,柱效越高,但壓力也越大。一般來(lái)說(shuō):
1、分析色譜選擇3-5μm的小顆粒填料。
2、預(yù)分離色譜可選擇10-15μm的大顆粒填料。
3、超快速分離可選1.8μm的超小顆粒填料。
四、選擇合適的柱尺寸
1、常見(jiàn)的柱尺寸有3-5μm,通常4.6mm內(nèi)徑的柱管長(zhǎng)度在50-250mm之間。
2、分離難度大時(shí),選擇長(zhǎng)的色譜柱,增大理論板數(shù),提高分離效果。
3、樣品量大或需要快速分析時(shí),選擇短的色譜柱。
4、內(nèi)徑越小,感光性越好,但負(fù)荷量小?？筛鶕?jù)需要選擇內(nèi)徑。
五、其他注意事項(xiàng)
1、評(píng)估實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備水平,是否能承受高壓。
2、選擇經(jīng)過(guò)認(rèn)證的品牌產(chǎn)品,確保填料的一致性。
3、新柱需要進(jìn)行預(yù)處理,確保柱性能穩(wěn)定后再使用。
4、合理使用柱,避免堵塞和污染。定期回溯保持柱性能。
合理選購(gòu)液相色譜柱,對(duì)獲得滿意的分離效果至關(guān)重要。需要根據(jù)具體的分析目的、樣品性質(zhì)、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備等情況綜合考慮,選擇最佳的液相色譜柱。
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