液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設(shè)備參數(shù)得到解決；而有些問題必須通過修改操作程序來解決。本文匯總了一些關(guān)于液相色譜圖譜問題的解決辦法，這些辦法也許能更有效的幫你解決問題。
1峰拖尾
原因和解決方法
1、篩板阻塞
a、反沖色譜柱
b、更換進口篩板
c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷
填充色譜柱
3、干擾峰
a、使用更長的色譜柱
b、改變流動相或更換色譜柱
4、流動相PH選擇錯誤
調(diào)整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰
5、樣品與填料表面的溶化點發(fā)生反應
a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑
b、更改色譜柱
2峰前延
原因和解決方法
1、柱溫低
升高柱溫
2、樣品溶劑選擇不恰當
使用流動相作為樣品溶劑
3、樣品過載
降低樣品含量
4、色譜柱損壞
更換色譜柱
3峰分叉
原因和解決方法
1、 保護柱或分析柱污染
取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶于流動相
改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
4峰變形
原因和解決方法
1、樣品過載
減少樣品載量
5早出的峰變形
原因和解決方法
1、樣品溶劑選擇不恰當
a、減少進樣體積
b、運用低極性樣品溶劑
6早出峰拖尾程度大于晚出峰
原因和解決方法
1、柱外效應
a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）
b、使用小體積的流通池
7K’增加時，脫尾更嚴重
原因和解決方法
1、二級保留效應，反相模式
a、加入三乙胺（或堿性樣品）
b、加入乙酸（或酸性樣品）
c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）
d、更換一支柱子
2、二級保留效應，正相模式
a、加入三乙胺（或堿性樣品）
b、加入乙酸（或酸性樣品）
c、加入水（或多官能團化合物）
d、試用另一種方法
3、二級保留效應，離子對
加入三乙胺（或堿性樣品）
8酸性或堿性化合物的峰拖尾
原因和解決方法
1、緩沖不合適
a、使用濃度50-100mM的緩沖液
b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液
9額外的峰
原因和解決方法
1、樣品中有其他組份
2、前一次進樣的洗脫峰
a、增加運行時間或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰
a、檢查流動相是否純凈
b、使用流動相作為樣品溶劑
c、減少進樣體積
10保留時間波動
原因和解決方法
1、溫控不當
調(diào)好柱溫
2、流動相組分變化
防止變化（蒸發(fā)、反應等）
3、色譜柱沒有平衡
在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱
11保留時間不斷變化
原因和解決方法
1、流速變化
重新設(shè)定流速
2、泵中有氣泡
從泵中除去氣泡
3、流動相選擇不恰當
a、更換合適的流動相
b、選擇合適的混合流動相
12基線漂移
原因和解決方法
1、柱溫波動
控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
2、流動相不均勻
（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。）
使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體
用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
4、檢測器出口阻塞
（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）
取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當或流速變化
更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時
用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。
7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成
檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑
8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。
使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整
重新設(shè)定基線。當檢測器動力學范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。
10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處
將波長調(diào)整至最大吸收波長處
13基線噪音（規(guī)則的）
原因和解決方法
1、在流動相、檢測器或泵中有空氣
流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液
檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動相混合不完全
用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）
減少差異或加上熱交換器
5、在同一條線上有其他電子設(shè)備
斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。
6、泵振動
在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器
14基線噪音
原因和解決方法
1、 漏液
檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。
2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成
檢查流動相的組成。
3、流動相各溶劑不相溶
選擇互溶的流動相
4、檢測器/記錄儀電子元件的問題
斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。
5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡
用強極性溶液清洗系統(tǒng)
6、檢測器內(nèi)有氣泡
清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器
7、流通池污染
（即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。）
用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
8、檢測器燈能量不足
更換燈
9、色譜柱填料流失或阻塞
更換色譜柱
10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常
維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置
15寬峰
原因和解決方法
1、流動相組成變化
重新制備新的流動相
2、流動相流速太低
調(diào)節(jié)流速
3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）
檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
4、檢測器設(shè)定不正確
調(diào)整設(shè)定
5、柱外效應影響
a、柱子過載
b、檢測器對反應時間或池體積響應過大
c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大
d、記錄儀響應時間太長
6、緩沖液濃度太低
增加濃度
7、保護柱污染或失效
更換保護柱
8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低
更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
9、柱入口塌陷
打開柱入口，填補塌陷或更換柱子
10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰
選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果
11、柱溫過低
提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75℃
12、檢測器時間常數(shù)太大
使用較小的時間常數(shù)
16分離度降低
原因和解決方法
1、流動相污染或變質(zhì)（引起保留時間變化）
重新配置流動相
2、保護柱或分析柱阻塞
去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
17所有的峰面積都太小
原因和解決方法
1、檢測器衰減設(shè)定過高
減少衰減的設(shè)定
2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大
設(shè)定較小的時間常數(shù)
3、進樣量太少
增大進樣量
4、記錄儀連接不當
使用正確的連接
18所有的峰面積都太大
原因和解決方法
1、檢測器衰減設(shè)定過低
采取較大的衰減
2、進樣過多
減少進樣量
3、記錄儀連接不正確
正確連接記錄儀
高壓輸液泵是液相色譜儀的關(guān)鍵部件，其作用是將流動相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜系統(tǒng)。對于帶在線脫氣裝置的色譜儀，流動相先經(jīng)過脫氣裝置再輸送到色譜柱。輸液泵的穩(wěn)定性直接關(guān)系到分析結(jié)果的重復性和準確性。
高壓液相色譜儀對高壓輸液泵的基本要求如下：
1、流量準確可調(diào)
對一般的分析工作而言，流動相的流速在0.5~2mL/min，輸液泵的最大流量一般為5~10mL/min。輸液泵的流量控制精度通常要求小于±0.5%。輸液泵必須能精確地調(diào)節(jié)流動相流量，這樣可以通過電子線路調(diào)節(jié)電極轉(zhuǎn)速或沖程長短來實現(xiàn)。流量的測定通常采用熱脈沖流量計。
2、耐高壓
高效液相色譜柱是將很細顆粒的填料，在高壓下填充到柱管中，為了保證流動相以足夠大的流速通過色譜柱，需要足夠高的柱前壓。通常要求泵的輸出壓力達到30~60MPa的高壓。
3、液流穩(wěn)定
輸液泵輸出的液流應無脈動，或配套脈沖抑制器。
4、泵的死體積小
為了快速更換溶劑和適于梯度洗脫，泵的死體積通常要求小于0.5mL。泵的結(jié)構(gòu)材料應耐化學腐蝕。
在器微型化過程中,尺寸的縮小不僅要考慮材料的性質(zhì)和制造上的可能,還要從原理上考慮尺寸縮小后所帶來的一系列問題。這些問題包括：
（1）分離系統(tǒng)中被分配的分子個數(shù)是否大于106,因為只有大于106才能得到符合統(tǒng)計結(jié)果的數(shù)據(jù);
?。?）因分離通道尺寸縮小,自然提高了單位柱長的效率,但是總長度的減少可能使總分離效能遠低于常規(guī);
?。?）對于質(zhì)量敏感型檢測器,經(jīng)過分離柱后單位時間內(nèi)到達檢測器的分子個數(shù)是否滿足檢測原理所要求的最小數(shù)目;
?。?）對于濃度型檢測器,到達檢測池的分子數(shù)目是否能滿足符合統(tǒng)計規(guī)律的分子數(shù)目;
（5）檢測微區(qū)內(nèi)的外加能量密度是否超過被檢測分子所能承受的極限;
?。?）微量流動相的輸送與控制;
?。?）因材料尺寸的縮小,表面層氧化或腐蝕對器件功能的影響。最后,色譜儀器微型化所帶來的好處不僅僅是單位長度分離效率的提高,而是總分離能力的保持甚至提高;不僅僅是分離系統(tǒng)或某個部件的微型化,而是整體的微型化;不僅僅是質(zhì)量靈敏度的提高,而是濃度靈敏度的保持或提高;不僅僅是能量和物質(zhì)的低消耗,而是使用的方便和友好;不僅僅是整體尺寸的縮小,更重要的是整機的穩(wěn)定性和可靠性的提高!
下面分別討論上述7個問題。
?。?）色譜分離的基本原理是有符合統(tǒng)計規(guī)律數(shù)目的分子群經(jīng)過不斷的兩相分配和分子碰撞,利用其分配系數(shù)的差異來達到分離的目的。這是一個宏觀參數(shù)。當分子數(shù)目低于這個數(shù)目時,就會偏離統(tǒng)計規(guī)律而出現(xiàn)所謂的漲落現(xiàn)象。分子數(shù)目越少,漲落現(xiàn)象越嚴重。當分子數(shù)目低于103個時,已沒有準確的色譜保留規(guī)律,因此也就失去了宏觀意義下的分離規(guī)律。一般地,保證符合統(tǒng)計規(guī)律的分子數(shù)目是106個。
例如內(nèi)徑30μm的填充毛細管液相色譜（μ2HPLC）柱或毛細管電泳柱,若分別保持10萬/m和40萬/m的分離柱效,直接進樣時不過載的進樣量分別為40pL（1pL=10-12L）和115pL,分子總數(shù)分別是112×1012～112×1014和415×1010～415×1012。樣品中含量低至1～0.01μL/L（對μ2HPLC）或低至20～0.2μL/L（對CE）的組分就不能滿足106個分子的數(shù)目要求,分離過程中就會出現(xiàn)上述問題。所以,上述分離系統(tǒng)對濃度高于這個指標的樣品分離時可以有重復的保留時間。如果考慮檢測方面的限制[參見下述的（3）和（4）>,痕量分析中用粗內(nèi)徑的填充色譜柱總是優(yōu)于微型色譜柱。
為了能進行痕量分析,微型分離分析系統(tǒng)往往采用樣品預濃縮技術(shù)以補償濃度靈敏度的不足。但為此而發(fā)展的技術(shù)也同樣適用于常規(guī)分離分析系統(tǒng),同樣可以提高常規(guī)儀器的靈敏度,除非樣品量受到嚴格限制。
?。?）45年前的色譜柱理論已經(jīng)指出,毛細管開口柱的內(nèi)徑越小,或填充柱的填料粒度越小,色譜柱的分離效率就越高。毛細管電泳亦然,只是理論上有些不同,如有散熱問題和塞子流型的特點。微型化中普遍采用的細內(nèi)徑分離柱并不是微型儀器的專利,所能達到的高柱效也不是最近才認識到的。如果在現(xiàn)有常規(guī)儀器中使用這種等效內(nèi)徑的色譜柱,再適當改進進樣技術(shù)和檢測器,就會有與微型色譜或芯片電泳同樣的單位柱長的柱效,同時還可以有極高的總分離效能,因為常規(guī)儀器中分離柱的長度很少受限,而高的分離效能才是真正有意義的。所以,微型色譜和芯片毛細管電泳用短分離柱而有快速分離的特點,并不是它真正的優(yōu)點,因為用同樣尺寸的分離柱可以分別在常規(guī)色譜和毛細管電泳上實現(xiàn)同樣的效果。
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