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原子熒光光度計(jì)（原子熒光光譜儀）是擁有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的分析儀器，它檢出限低、靈敏度高，在重金屬檢測(cè)中占有重要地位。其中的重金屬元素錫（Sn）是人體必需的微量元素，錫可以促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，影響血紅蛋白的功能，促進(jìn)傷口愈合等功能，但過(guò)量的錫會(huì)導(dǎo)致頭暈、腹瀉等癥狀，有機(jī)錫毒性很強(qiáng)可以破壞人體的肝臟以及神經(jīng)系統(tǒng)。因此，錫也是食品檢測(cè)中主要的檢測(cè)指標(biāo)，今天金索坤和大家分享如何應(yīng)用原子熒光光度計(jì)檢測(cè)食品中的錫。
應(yīng)用原子熒光光度計(jì)測(cè)錫的原理：首先，試樣經(jīng)消化后，在NaBH4作用下生成錫的氫化物(SnH4).并由載氣帶人原子化器中進(jìn)行原子化，在錫空心陰極燈的照射下，基態(tài)錫原子被激發(fā)至高能態(tài)，在去活化回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出特征波長(zhǎng)的熒光，其熒光強(qiáng)度與錫含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液比較定量。
以金索坤SK-樂(lè)析原子熒光光度計(jì)為例參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 5009.16-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中錫的測(cè)定》檢測(cè)食品中錫含量的操作如下：
首先，稱取試樣 1.0 g～5.0 g于錐形瓶中，加人20.0 mL硝酸-高氯酸混合溶液(4+1)，加1.0 mL硫酸，3粒玻璃珠，放置過(guò)夜。次日置電熱板上加熱消化，如酸液過(guò)少，可適當(dāng)補(bǔ)加硝酸，繼續(xù)消化至冒白煙，待液體體積近1 mL時(shí)取下冷卻。用水將消化試樣轉(zhuǎn)入50 ml容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻備用。同時(shí)做空白試驗(yàn)。
取定容后的試樣10.0 mL于25 mL比色管中，加入3.0 mL硫酸溶液(1+9)，加入2.0 mL硫脲(150 g/L)+抗壞血酸(150 g/L)混合溶液，再用水定容至25 mL.搖勻。
取樣品溶液，按照所使用的原子熒光光度計(jì)推薦測(cè)試條件輸入相關(guān)參數(shù)。
光源：空芯陰極燈，燈電流80mA
負(fù)高壓：-300～-350V
主氣流量：為定值，在500mL/min左右
輔氣流量：800~1000mL/min
泵速：70~90轉(zhuǎn)/min轉(zhuǎn)/min
（僅供參考，根據(jù)實(shí)測(cè)樣品進(jìn)行調(diào)整)
預(yù)熱，待儀器穩(wěn)定后，先測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，后測(cè)定樣品。通過(guò)以上操作就可以檢測(cè)出樣品錫含量。
重金屬污染對(duì)人體和環(huán)境的危害不言而喻，因此錫等重金屬的檢測(cè)就顯得十分重要。北京金索坤技術(shù)開發(fā)有限公司作為一家只專注原子熒光光度計(jì)的研發(fā)以及生產(chǎn)的公司會(huì)不斷地推陳出新，研發(fā)出更加優(yōu)質(zhì)高效的原子熒光產(chǎn)品助力重金屬的檢測(cè)。
金索坤SK-樂(lè)析 原子熒光光度計(jì)（原子熒光光譜儀）
與砷、汞、鉛等重金屬元素不同，硒具有抗癌、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等作用，所以“補(bǔ)硒”成了養(yǎng)生的重要方法之一。但同時(shí)也有報(bào)道指出面，人身體內(nèi)攝入過(guò)量的硒元素會(huì)引起心律不齊、溶血等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可能導(dǎo)致死亡。因此，國(guó)際衛(wèi)生組織建議人均硒的攝入量應(yīng)為50mg-250mg，可以檢測(cè)食物中硒含量的儀器有很多，其中原子熒光光度計(jì)檢出限低、靈敏度高，在硒等重金屬元素的檢測(cè)中發(fā)揮重要作。今天金索坤和大家分享如何應(yīng)用原子熒光光度計(jì)檢測(cè)食品中的硒。
原子熒光光度計(jì)測(cè)硒的原理：
試樣經(jīng)酸加熱消化后，在6 mo1/L 鹽酸介質(zhì)中，將試樣中的六價(jià)硒還原成四價(jià)硒，用NaBH4或KBH4做還原劑，將四價(jià)硒在鹽酸介質(zhì)中還原成硒化氫（H2Se），由載氣（氬氣）帶入原子化器中進(jìn)行原子化，在硒空心陰極燈照射下，基態(tài)硒原子被激發(fā)至高能態(tài)，在去活化回到基態(tài)時(shí)，發(fā)射出特征波長(zhǎng)的熒光，其熒光強(qiáng)度與硒含量成正比。與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量
核酸的定量是便攜分光光度計(jì)使用頻率高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如:1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測(cè)試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者頭痛的問(wèn)題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和度。如Eppendorf Biophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%(1A)。這樣多次測(cè)試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng)，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等:在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi)混合液不能存在氣泡，空白液無(wú)懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的小體積等多個(gè)操作事項(xiàng)。
除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評(píng)估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測(cè)溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
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