測(cè)定總糖的經(jīng)典化學(xué)方法都是以其能被各種試劑氧化為基礎(chǔ)的。這些方法中，以各種根據(jù)斐林氏溶液的氧化作用的改進(jìn)法的應(yīng)用范圍廣。在這里我們主要給大家介紹蒽銅比色法。蒽銅比色法要求比色時(shí)糖液濃度在一定范圍內(nèi)，但要求檢測(cè)液澄清，此外，在大多數(shù)情況下，測(cè)定要求不包括淀粉和糊精，這就要在測(cè)定前將淀粉，糊精去掉，這樣就使操作復(fù)雜化，限制了其廣泛應(yīng)用。

    蒽銅的比色法

1.原理：

    糖與硫酸反應(yīng)脫水生成羥甲基呋喃甲醛，生產(chǎn)物再與蒽銅縮合成蘭色化合物，其顏色深淺與溶液中糖的濃度成正比，可比色定量。

2.試劑

（1）    硫酸鋅溶液：溶解500g化學(xué)硫酸鋅于500ml水中

（2）    K4Fe(CN)6·3H2O溶液：溶解10.6g化學(xué)K4Fe(CN)6·3H2O于100ml水中

（3）    0.2％蒽銅試劑：溶解蒽銅0.2g于100ml95％硫酸中，置棕色瓶中冷暗處保存

（4）    0.1％葡萄糖液：準(zhǔn)確稱干燥葡萄糖0.1000g 定容100ml

3.操作方法

（1）    標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

（2）    100ml容量瓶編號(hào) 

在恒溫水浴鍋中加熱6分鐘，取出冷卻→用1cm比色杯→610nm測(cè)定吸光度→作出以吸光度為橫坐標(biāo)，糖液濃度為縱坐標(biāo)的準(zhǔn)

曲線

      （3）    樣品測(cè)定

稱10g樣品→于100ml熱水加入500ml容量瓶中－加硫酸鋅5ml→沸水浴5分鐘→取出再搖動(dòng)下加K4Fe(CN)6·3H2O5ml，→冷卻→定容500ml→過(guò)濾→吸濾液25ml→于250ml容量瓶→定容250ml→取稀釋液1ml，于比色管中→加10ml蒽銅試劑→搖勻→恒溫水浴鍋中加熱6分鐘→冷卻→比色

試驗(yàn)注意

1，樣液必須清澈透明，加熱后不應(yīng)有蛋白質(zhì)沉淀

2，樣品顏色較深時(shí)，可用活性炭脫色后再進(jìn)行測(cè)定

3，此法與所用的硫酸濃度和加熱時(shí)間有關(guān)

4，所取糖液濃度在1-2.5mg/100ml之間