您在日常的實(shí)驗(yàn)過程中用的色譜柱有沒有壽命過短的問題？不但實(shí)驗(yàn)成本攀升，實(shí)驗(yàn)效果都沒法保證。我們今天就邀請(qǐng)?jiān)滦窨萍嫉墓こ處焷頌槟獯鹩嘘P(guān)色譜柱使用壽命的相關(guān)問題，助您的柱子“益壽延年”！
為什么檢測(cè)該項(xiàng)目使用不同品牌的色譜柱，壽命均在100針左右？
1）有可能的原因是樣品組分吸附在色譜柱的前段?？赡苁怯捎跇悠吩诹鲃?dòng)相中的溶解度低而沉淀出來的，也有可能是強(qiáng)吸附，或是樣品本身與填料表面發(fā)生微弱的不可預(yù)知的化學(xué)反應(yīng)。樣品溶液本身的pH值在色譜柱的耐受臨界值附近，而且進(jìn)樣體積較大（內(nèi)徑4.6mm，上樣體積在50ul以上）對(duì)柱頭端的填料影響比較大，通常這樣的情況伴隨柱壓升高。
解決方法：選擇合適的樣品前處理技術(shù)，去除掉強(qiáng)保留物質(zhì)。使用保護(hù)柱，盡量選擇與分析柱同種填料，同種鍵合方法的保護(hù)柱。如果使用不同品牌的填料、裝填工藝的保護(hù)柱，在分離能力和保護(hù)分析柱方面可能得不到好的效果。也不要使用更大粒徑的保護(hù)柱，更大粒徑或者裝填較差的保護(hù)柱會(huì)因?yàn)樗姆逭箤捵饔枚鴮?dǎo)致分離能力下降。
2）鍵合相脫落變性。色譜條件多方作用導(dǎo)致壽命短，這是目前的色譜技術(shù)不能解決的，一般情況下小基團(tuán)鍵合相更容易被水解而脫落。流動(dòng)相中鹽濃度越高，越容易引起水解。這種情況下，就只能重新開發(fā)色譜條件。
為什么該品牌的色譜柱一直很好，就這一支壽命異常短？
確定一下使用頻率、沖洗頻率、流動(dòng)相的更換頻率、流動(dòng)相的試劑品牌、純度等是否和之前一樣，如果有更換，那壽命有差異是正常現(xiàn)象。如果都與之前相當(dāng)，那需要檢查這支色譜柱是否受過劇烈震蕩，比如：不小心摔過，或者運(yùn)輸過程中受過劇烈震蕩，建議與廠家的技術(shù)人員溝通。
為什么使用該品牌的支色譜柱用于方法建立時(shí)壽命長(zhǎng)，方法建立后，開始進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí)，卻覺得壽命短？
這種情況的發(fā)生，很大的原因是，前期建立方法時(shí)，并不是連續(xù)做項(xiàng)目，而是不停地更換流動(dòng)相。這就意味著色譜柱的沖洗頻率比較高，而更換的流動(dòng)相的清潔度也是比較好的。建立方法的時(shí)候很難連續(xù)進(jìn)樣多次，有時(shí)候甚至一周才做一次項(xiàng)目，這樣就會(huì)產(chǎn)生支柱子使用時(shí)間更久的錯(cuò)覺。而方法建立后，做方法驗(yàn)證，流動(dòng)相固定下來，就會(huì)一次性配置較大體積的流動(dòng)相，這樣流動(dòng)相較易變質(zhì)，有時(shí)肉眼不能直接分辨。而且會(huì)連續(xù)多次過夜進(jìn)樣，這樣對(duì)色譜柱的沖洗也不是很及時(shí)。這些都是可能導(dǎo)致色譜柱壽命變短的因素。
色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動(dòng)相及使用頻率有關(guān)系外，最主要的是與日常的維護(hù)密切相關(guān)。色譜柱的使用壽命主要是柱效和柱壓兩個(gè)指標(biāo)來衡量，如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認(rèn)為該色譜柱已經(jīng)結(jié)束。因此，延長(zhǎng)色譜柱使用壽命的關(guān)鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是色譜柱的維護(hù)方法：
一、流動(dòng)相的PH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)
流動(dòng)相超過其PH范圍將會(huì)導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，使用壽命變短。由于流動(dòng)相的PH控制不當(dāng)而對(duì)色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對(duì)待，嚴(yán)格控制流動(dòng)相的PH值。
二、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒
樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會(huì)引起柱壓的升高，而且也會(huì)引起柱效下降，因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純?cè)噭?，在分析樣品前?duì)樣品進(jìn)行針筒過濾，流動(dòng)相過0、45μm濾膜。
三、使用保護(hù)柱或在線過濾器
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過濾后并不能完全消除固體顆粒物質(zhì)，因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器。
如果色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進(jìn)行補(bǔ)救：
1、先在色譜柱前加上保護(hù)柱或在線過濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min、
2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器，然后反向使用。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動(dòng)相以1、0ml/min流速?zèng)_洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過渡流動(dòng)相以0、2ml/min流速?zèng)_洗色譜柱過夜。
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前，用與初始流動(dòng)相組成相同的過渡流動(dòng)相以1、0ml/min流速?zèng)_洗60min，再用該過渡流動(dòng)相以1、0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意：過渡流動(dòng)相是指有機(jī)相和水相的組成與分析流動(dòng)相相同，區(qū)別只是過渡流動(dòng)相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補(bǔ)救方法：
方案1：用甲醇/20/80以1、0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
方案2：用甲醇/水=20/80以0、2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對(duì)樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會(huì)引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會(huì)導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對(duì)色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng)，需要一定的時(shí)間才會(huì)體現(xiàn)出來，但對(duì)許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
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