日立液相色譜只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
日立液相色譜成為解決生化分析問題有前途的方法。由于液相色譜儀具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。日立液相色譜與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。
日立液相色譜常用的脫氣方法有以下幾種:
1、吹氦脫氣法使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣,在0、1Mpa壓力下,以約60ml/min流速通入流動(dòng)相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑,脫氣效果較好,但在國內(nèi)因氦氣價(jià)格較貴,本法使用較少;
2、加熱回流法此法的脫氣效果較好;
3、抽真空脫氣法此時(shí)可使用微型真空泵,降壓至0、05-0、07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機(jī)械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化,故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后再進(jìn)行混合,以保證混合后的比例不變。
4、超聲波脫氣法它是目前實(shí)驗(yàn)室使用廣泛的脫氣方法,將配制好的流動(dòng)相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便,基本能滿足日常分析的要求。
5、在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中,并結(jié)合膜過濾器,實(shí)現(xiàn)了流動(dòng)相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法,并適用于多元溶劑體系。
在日立液相色譜系統(tǒng)開始工作前,可以用注射器連接恒流泵的排空閥,抽入流動(dòng)相,將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。
任何顆粒物進(jìn)進(jìn)液相色譜儀后都會在柱子進(jìn)口端被篩板擋住,zui后的結(jié)果是將柱子堵塞,表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此,要采取各種預(yù)防 措施,包括操縱步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計(jì),努力防止或減少顆粒物進(jìn)進(jìn)液相色譜儀中,從而延長儀器和色譜柱的使用壽命,并進(jìn)步數(shù)據(jù)的可靠性。
在液相色譜儀中,顆粒物的主要來源有三個(gè)途徑:活動(dòng)相、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1、被測樣品
使用針筒式過濾器不可能100%得到通過過濾器的被測樣品,總會或多或少的丟失。丟失來自這樣幾方面:過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等。
2、活動(dòng)相
無論是液相色譜儀HPLC級的水還是在實(shí)驗(yàn)室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水,zui后一步也是通過0.2μm微孔濾 膜。任何一種緩沖液中加進(jìn)了固體物,必然活動(dòng)相過濾將。少量雜質(zhì)顆粒存在于活動(dòng)相中必然成為殘?jiān)?br />
解決辦法:2. 1.活動(dòng)相制備僅采用HPLC級液體時(shí)不需要過濾,反之所有活動(dòng)相組成在使用前必須過濾。
2.2在連接儲液瓶和泵的輸液管的末端進(jìn)口采用下沉式過濾器(常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種)也是很重要的。這個(gè)過濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì),所以它不能取代活動(dòng)相過濾步驟,但是它能除往系統(tǒng)中的塵土并保證儲液瓶、輸液管使用的可靠性。
2.3.推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個(gè)0.45 或0.5μm的在線多孔過濾器,接在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間,即使已使用了保護(hù)柱。這個(gè)在線過濾器將成為擋板代替柱頭的濾板,而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板, 既便宜,更換又方便(幾分鐘就可更換)。若采用在線過濾,液相色譜儀檢測每批樣品開始前記錄下壓力值,當(dāng)壓力上升一定值,例如25%或增加 500psi,應(yīng)該更換玻璃砂芯濾板了,更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復(fù)到原來的壓力值。
3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物
zui后,在液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個(gè)主要來源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
3.1、在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年,因此建議半年或一年更換這些密封墊?! ?/span>
3.2、原裝密封墊的密封效果,更換以后輕易引起活動(dòng)相滲漏。所以,只要不漏液就不要輕易更換密封墊。