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加強(qiáng)和規(guī)范色譜柱的管理有效延長(zhǎng)使用壽命 色譜柱常見(jiàn)問(wèn)題解決方法

時(shí)間：2020-07-23    來(lái)源：儀多多儀器網(wǎng)    作者：儀多多商城     
     液相色譜法是20世紀(jì)70年代急劇發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)、快速的分離、分析技術(shù)。液相色譜法是指流動(dòng)相為液相的色譜技術(shù)，在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上，引入氣相色譜法理論，在技術(shù)上采用高壓泵、固定相和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快、分析效率高和操作自動(dòng)化，它具有高壓、高速、、高靈敏度等特點(diǎn)。
    它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑，緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后依次進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)由記錄儀、積分儀或色譜工作站記錄。
    色譜柱是液相色譜的心臟，在液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。
    色譜柱使用一段時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時(shí)間改變等變化，如不采取措施，將會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。因此，有必要加強(qiáng)和規(guī)范色譜柱的管理，從而延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
    影響色譜柱使用壽命的因素
    1 流動(dòng)相
    在以水溶液為流動(dòng)相時(shí)，水溶液中的微生物例如細(xì)菌容易生長(zhǎng)，當(dāng)用水溶液或有機(jī)酸緩沖液保護(hù)柱子時(shí)，一些霉菌可能在色譜柱中滋生，堵塞固定相顆粒間的空隙。由于濕法填充技術(shù)的問(wèn)世，目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um，流動(dòng)相中的顆粒雜質(zhì)很容易先沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。流動(dòng)相的pH值對(duì)色譜柱也有影響，特別是對(duì)化學(xué)鍵合硅膠填料，水溶液的pH***適范圍在2~7.5之間，當(dāng)pH>8時(shí)，硅膠會(huì)釋出生成絮狀物堵塞柱子，且難以復(fù)原，柱效很快降低，甚至完全失效。
    當(dāng)在緩沖液中加入有機(jī)溶劑例如甲醇或乙腈時(shí)，鹽類(lèi)的溶解度下降，會(huì)析出鹽沉淀，堵塞柱子。同時(shí)流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑和鹽會(huì)腐蝕色譜柱頭的篩板，產(chǎn)生柱頭凹陷。流動(dòng)相的極性對(duì)柱子也有一定影響，對(duì)于硅膠柱，甲醇、水、冰乙酸等極性較大物質(zhì)會(huì)破壞填料；反之，對(duì)于化學(xué)鍵合硅膠，極性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。堿性溶液會(huì)破壞陽(yáng)離子交換樹(shù)脂色譜柱，而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹(shù)脂柱。
    2 樣品和固定相
    如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動(dòng)相中，在通過(guò)固定相會(huì)堵塞柱子，樣品中的顆粒雜質(zhì)也會(huì)堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質(zhì)等通過(guò)柱子時(shí)會(huì)產(chǎn)生不可逆吸附，這樣固定相的活性點(diǎn)被覆蓋。樣品組分還會(huì)與固定相產(chǎn)生反應(yīng)，尤其是對(duì)于氨基柱的影響較為嚴(yán)重。因?yàn)榘被着c酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點(diǎn)，使保留時(shí)間縮短。色譜柱鍵合相基團(tuán)脫落、固定相分解和活性基團(tuán)變性以及會(huì)影響柱效和保留時(shí)間的顯著改變。大多數(shù)鍵合相都是通過(guò)硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上，形成帶有有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R(R為CnH2n+1)，硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂，使鍵合基團(tuán)脫落。
   
 　　離子色譜柱日常維護(hù)及保養(yǎng)：
　　
　　1、色譜柱中應(yīng)封存淋洗液保存，保存溫度4-10攝氏度，使用溫度20-60攝氏度。
　　
　　2、國(guó)產(chǎn)NJ-SA-4A色譜柱應(yīng)在pH2-12范圍內(nèi)使用，淋洗液及樣品濃度均不能超出此范圍。進(jìn)口Shodex IC 色譜柱應(yīng)在pH3-12范圍內(nèi)使用，淋洗液及樣品濃度均不能超出此范圍。
　　
　　3、色譜柱zui大使用壓力不能超過(guò)15MPa
　　
　　4、拆下色譜柱時(shí)，應(yīng)在色譜柱溫度降至室溫后拆下，拆下后立刻以堵頭密封.
　　
　　5、含有重金屬的樣品，應(yīng)以陽(yáng)離子交換樹(shù)脂處理后，去除重金屬才能進(jìn)樣
　　
　　6、含有有機(jī)物的樣品，應(yīng)過(guò)C18固相萃取柱后進(jìn)樣
　　
　　7、樣品硬度較高時(shí)，應(yīng)先去除樣品中的鈣鎂離子
　　
　　8、樣品進(jìn)樣前必須以0.22μm微孔濾膜過(guò)濾或一次性針頭過(guò)濾器過(guò)濾。
　　
　　9、室溫保存色譜柱時(shí)，應(yīng)每周通淋洗液一次。
　　尺寸排阻色譜柱通過(guò)優(yōu)化填料的粒徑和細(xì)孔容積，實(shí)現(xiàn)了色譜柱性能的提升，和色譜柱操作壓強(qiáng)的降低。特別是對(duì)單克隆抗體三聚體/二聚體/單體的分離性能有很大的提高，對(duì)單體/片段也有很好的分離效果。
　　尺寸排阻色譜柱采用單分散、球形、表面鍵合了一層納米厚度中性親水性薄膜的3 ?m硅膠作為填料。3μm的粒徑結(jié)合大的孔體積使其成為目前國(guó)際上分辨率優(yōu)良的體積排阻柱。成都摩爾科學(xué)儀器有限公司獨(dú)有的表面鍵合技術(shù)保證了填料表面鍵合的很大化，使其具有高的化學(xué)穩(wěn)定性及小的非特異性吸附。尺寸排阻色譜柱體積排阻柱有100、150及300三種孔徑選擇，廣泛的應(yīng)用于生物分子及水溶性聚合物的分離與分析。
　　尺寸排阻色譜柱的保存：日常使用中，Sepax SEC色譜柱建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中(pH7.0)。如長(zhǎng)期不用時(shí)，可將色譜柱保存至20%乙醇中，以防止菌體污染。(注：可根據(jù)具體使用條件選擇保存方式，如實(shí)驗(yàn)條件為緩沖鹽體系，建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中，pH 7.0。若實(shí)驗(yàn)條件為有機(jī)溶劑體系，建議保存在20%乙醇中。)
　　尺寸排阻色譜柱的清洗：多次使用后某些樣品可能會(huì)吸附到入口篩板或填料上，當(dāng)積累至一定程度時(shí)會(huì)出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰型展寬的現(xiàn)象，此時(shí)需要清洗色譜柱。一般流程為：斷開(kāi)檢測(cè)器，反接色譜柱，在低于50%較大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。
　　尺寸排阻色譜柱是7.8 mm ID X 30 cm通用尺寸的高性能SEC色譜柱。采用以親水性乙烯基聚合物為基材的高親水性填料充填，因此適合用于分析水溶性聚合物。對(duì)于分子量較小的肽、蛋白質(zhì)聚合物、DNA片段和病毒的分析，TSKgel PL 色譜柱具有很好的分離效果。
　　尺寸排阻色譜柱由親水性球形聚甲基丙烯酸酯顆粒填充。尺寸排阻色譜柱的主要應(yīng)用范圍在于分析水溶性聚合物，如纖維素、丙烯酰胺、二醇、葡聚糖、聚乙烯醇和低聚糖等?；瘜W(xué)修飾的尺寸排阻色譜柱提高了陽(yáng)離子型聚合物的回收率。



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