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液相色譜測(cè)定葛根素注射液中葛根素的含量 液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題解決方法

時(shí)間:2020-07-23    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

  葛根是一種常用中藥,具有解肌退熱、生津、透疹、升陽(yáng)止瀉之功效,葛根素是葛根中的主要活性成分之一。呈白色針狀結(jié)晶,能溶于水,但溶解度小,其水溶液為無(wú)色或微黃色。具有改善心腦血管循環(huán)、降低心肌耗氧量,降低血糖,防止高血壓及動(dòng)脈硬化,提高機(jī)體免疫力,抗菌,抗病毒等多種藥理作用。葛根素因毒性小,安全范圍廣,療效好而臨床應(yīng)用價(jià)值。

   目前市場(chǎng)上葛根素有多種劑型,但是其劑型和標(biāo)準(zhǔn)各不相同,本文比較了兩種葛根素注射液的外觀質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量,并用HPLC測(cè)定了其主要有效成分葛根素的含量,具有方便、準(zhǔn)確,便于控制產(chǎn)品的質(zhì)量等優(yōu)點(diǎn)。

儀器準(zhǔn)備

 

儀器簡(jiǎn)介

    LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測(cè)器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺(tái)P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測(cè)器及恒溫柱箱等,實(shí)行多元高壓洗脫、波長(zhǎng)掃描等功能。

 

應(yīng)用領(lǐng)域

化合物檢測(cè)、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測(cè)、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析

 

譜條件:

 

色譜柱

SymmetryC18柱(3.9mm×150mm,5μm)

流動(dòng)相

甲醇-水(體積比為35:65)

檢測(cè)波長(zhǎng)

250nm

 進(jìn)樣量

  10μL

 流速

1.0ml/min

 

譜圖分析



   進(jìn)樣閥在進(jìn)樣過(guò)程中,必須是非常清潔的,否則得不到較好的結(jié)果。進(jìn)樣閥切換到進(jìn)樣位置(Inject)后,要在此位置保持一段時(shí)間,使流動(dòng)相充分沖洗樣品定量管,這樣可以保證有較高的精確度,而且不用另外再?zèng)_洗樣品定量管。這種由色譜儀器控制的沖洗顯然要比手動(dòng)沖洗更好些。注意:沖洗需要的流動(dòng)相體積至少為所進(jìn)樣品體積的10倍。例如,如果取20μL樣品至100μL樣品定量管中,而流動(dòng)相此時(shí)的流速為1mL/min,則需要在進(jìn)樣位置至少保持12s,即:20μL×10/1000μL·min-1=0.2min=12s。

    當(dāng)樣品定量管經(jīng)過(guò)充分的沖洗后,可以將旋柄轉(zhuǎn)回取樣位置(Load),也可以繼續(xù)保持在進(jìn)樣位置,到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時(shí),將樣品進(jìn)樣針或微量樣品進(jìn)樣針從進(jìn)樣閥中拔出。

    為防止交叉污染,正常情況下不必每次進(jìn)樣后都沖洗進(jìn)樣閥注射針導(dǎo)入口。進(jìn)樣閥內(nèi)根據(jù)專利設(shè)計(jì)的直接連接進(jìn)樣孔,可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端,沒(méi)有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進(jìn)樣時(shí),就不會(huì)有上一次殘留的樣品進(jìn)入樣品定量管。

    但是在進(jìn)樣針頭插入或拔出過(guò)程中,會(huì)有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測(cè)定顯示這種殘留有1nL ~ 10nL。這表明進(jìn)20μL樣品,會(huì)殘留0.005% ~ 0.05%。每次進(jìn)樣后沖洗注射針導(dǎo)入口可以將此殘留沖洗干凈。沖洗注射針導(dǎo)入口的過(guò)程為:設(shè)定流動(dòng)相的流速為0.1mL/min ~ 1mL/min,將注射針導(dǎo)入口沖洗頭(Rheodyne部件號(hào)7125-054)連接到一只體積相對(duì)較大的注射器上,用大量的流動(dòng)相只在進(jìn)樣位置清洗注射針導(dǎo)入口。這樣進(jìn)入進(jìn)樣閥中的液體繞過(guò)樣品定量管由樣品溢出管5# 口排出。這一過(guò)程可以將注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈徹底清洗。而采用注射器完全插入式的沖洗方式,則不能全部清洗上述部分的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導(dǎo)入口時(shí),針頭推動(dòng)注射針密封圈內(nèi)少量樣品液體(上一次沖洗注射針導(dǎo)入管留下的)進(jìn)入樣品定量管。當(dāng)該樣品液體與所用的流動(dòng)相組成不同,且同時(shí)采用部分充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí),在高靈敏度的檢測(cè)器上可能出現(xiàn)怪峰。所以沖洗注射針時(shí)可以用流動(dòng)相沖洗。





 

  一、硅膠鍵合相的穩(wěn)定性:
  
  1、鍵合相的使用壽命取決于鍵合的有機(jī)官能團(tuán)在硅膠表面的覆蓋程度。當(dāng)覆蓋量大或呈多分子覆蓋層時(shí),會(huì)增加穩(wěn)定性。
  
  2、通常正相鍵合相的穩(wěn)定性低于反相鍵合相。
  
  3、反相烷基鍵合相的穩(wěn)定性與使用的流動(dòng)相的PH值有關(guān),通常水溶液的PH= 2~8。
  
  4、硅膠中的殘留硅醇基會(huì)對(duì)色譜分離產(chǎn)生不良影響。
  
  二、鍵合相色譜分離的重現(xiàn)性:
  
  由于鍵合相制備時(shí)選用基體硅膠特性的差別和鍵合反應(yīng)時(shí)官能團(tuán)覆蓋量的不同,會(huì)產(chǎn)生載體誘導(dǎo)選擇性的變化。
  
  三、鍵合相色譜分離的選擇性:
  
  在反相色譜中,使用同一種ODS固定相,并用兩種極性相近但由不同溶劑組成的流動(dòng)相時(shí),會(huì)由于溶劑誘導(dǎo)選擇性的變化,而獲得不同的分析結(jié)果。
  
  四、疏水塌陷:
  
  鍵合相色譜柱在有機(jī)溶劑含量低甚至100%水流動(dòng)相條件下,一旦流速停止,推動(dòng)水溶液流動(dòng)相進(jìn)入硅膠孔隙的壓力減小,疏水的微孔表面排斥極性流動(dòng)相,會(huì)發(fā)生鍵合相孔隙脫水,從而導(dǎo)致所謂的疏水塌陷,對(duì)化合物的保留能力大大減弱。
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