賽默飛紫外分光光度計故障及原因分析
（1）不使用氘燈時如何關(guān)閉氘燈
當(dāng)連接儀器時，選擇儀器＞配置＞保養(yǎng)標(biāo)簽，然后點(diǎn)擊氘燈邊上的燈狀態(tài)框，除去復(fù)選標(biāo)記。只要掃描范圍和固定波長測定不在氘燈的范圍之內(nèi)時，氘燈將處于關(guān)閉狀態(tài)。
（2）如何決定所用的通帶
選擇測定光譜中窄峰的半高度，然后除以10。例如峰的半高度寬是20nm，通帶的優(yōu)選值是2nm。
（3）初始化剛完成，使用哪條基線
使用后一次存儲的基線。儀器在初始化時不進(jìn)行基線校正?？蓲呙枰淮瘟憔€，看基線是否完好，如果可以，就使用存在的基線。儀器在出廠時存儲有基線。如果未進(jìn)行過基線校正，則使用的是出廠時的基線。
（4）如果發(fā)生通訊故障，應(yīng)該檢查哪些項(xiàng)目
①檢查在儀器配置屏幕（選擇儀器＞配置）中是否選擇了合適的通訊口；
②檢查電纜是否正確，牢固地連接
③檢查儀器的電源是否已經(jīng)打開
（5）燈是如何進(jìn)行準(zhǔn)直的
實(shí)際上燈并不移動。在初始化時，驅(qū)動燈反光鏡的步進(jìn)馬達(dá)連接有傳感器，當(dāng)檢測器發(fā)現(xiàn)能量大時，反饋信號到燈室，步進(jìn)馬達(dá)的傳感器自動記憶此時的反光鏡位置。當(dāng)檢查所有的位置后，反光鏡自動返回到記憶的位置。
（6）紫外區(qū)讀數(shù)漂移的原因
確認(rèn)氘燈是否點(diǎn)亮。氘燈的使用時間是否超過了預(yù)期的500h壽命，一旦超過，光強(qiáng)減弱，也許需要更新。此外可檢查夾縫寬度的設(shè)置是否太小。
（7）執(zhí)行了自動調(diào)零后儀器處于什么狀態(tài)
自動調(diào)零把當(dāng)前固定波長的光度讀數(shù)調(diào)節(jié)為0或者100%，取決于測定的方式。使用自動調(diào)零減去了空白讀數(shù)。通常，在單個固定波長測定時使用自動調(diào)零，如果是多波長測定，應(yīng)該執(zhí)行基線校正。
（8）為什么執(zhí)行自動調(diào)零后光譜仍然沒有得到有效的校正
因?yàn)樽詣诱{(diào)零只校正一個點(diǎn)；要校正光譜范圍，需要進(jìn)行基線校正或精細(xì)的基線校正。精細(xì)的基線校正應(yīng)該定期進(jìn)行，一般每月一次，在樣品室中不必放任何容器。
（9）基線校正后儀器的狀態(tài)如何？
基線校使時儀器在制定得波長范圍內(nèi)的光譜讀數(shù)調(diào)整為零。
（10）為什么基線校正不能正常起作用
是否樣品室中放了樣品？基線校正時有三種選擇，可確?；€校正的正常。
①樣品室池架內(nèi)空置（空氣對空氣）。此時校正儀器的基線，特別適合精細(xì)的基線校正
②樣品池中放入溶劑，參比側(cè)空置
③樣品和參比池中都放入溶劑
需要確認(rèn)樣品室的門已經(jīng)關(guān)好。雜散光會影響基線的質(zhì)量。此外，在指定的波長范圍內(nèi)溶劑和樣品池的材料匹配。
（11）夾縫寬改變以后情況如何
多數(shù)場合下（紫外/可見區(qū)），設(shè)置夾縫寬也等于設(shè)置了帶寬，換言之設(shè)置了光譜的分辨率。夾縫寬改變，改變了光束的集合尺寸。在使用微量池和流通池時就要權(quán)衡考慮，增加夾縫寬可增加光通量降低噪聲。但是，使用大的夾縫寬，噪聲是降低了，付出的代價是分辨率也隨之降低了。
（12）為什么有時在儀器初始化中會出現(xiàn)氘燈能量或波長正確度故障
出現(xiàn)上述現(xiàn)象的原因可能如下。
①樣品盒參比池中有樣品池
②使用某些附件，如池定位裝置、抽吸單元等，沒有坐落在正確的位置上或未準(zhǔn)直。
③如果安裝了抽吸單元，流通池臟了、空了或沒有準(zhǔn)直。
④氘燈的使用時間接近或超過預(yù)期的500h壽命，燈的能量降低乃至不能通過能量檢查，并且由于噪聲增加，使波長正確度的檢查也失敗。此時，換新的燈一切問題迎刃而解。
如何正確使用熒光分光光度計來進(jìn)行測試呢？以下為您詳述：
熒光分光光度計測試步驟
(一)樣品準(zhǔn)備
1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo)，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋，則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。
2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測定。
(二)操作步驟
1.開機(jī)：接通電源，打開主機(jī)開關(guān)，點(diǎn)燃(打開)光源后，根據(jù)說明書要求啟動計算機(jī)。
2.檢測前準(zhǔn)備：參照儀器說明書，在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn)，檢測前儀器應(yīng)預(yù)熱。
3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時間等)。
4.基本測定
(1)熒光激發(fā)光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描發(fā)射波長，找到maxλem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長的函數(shù)，便得到激發(fā)光譜。
(2)熒光發(fā)射光譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，掃描激發(fā)波長，找到maxλex，以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。
(3)差譜測定
設(shè)置儀器參數(shù)，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當(dāng)時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?，對樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測量參數(shù)，設(shè)置λex、λem，采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強(qiáng)度。
(6)定量測定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定的測定條件下，設(shè)置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強(qiáng)度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。
(三)分析結(jié)果的表述
1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。
2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計算顯示。
3.定量測試：在相同的測定條件下，測定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測定后，由工作曲線求出該溶液的濃度。
熒光分光光度計使用注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)開始前，應(yīng)提前打開儀器預(yù)熱，并配制好所需的溶液，對于已經(jīng)配制好的溶液，在不用時放在4℃冰箱中保存，放置時間超過一星期的溶液要重新配制。
2.實(shí)驗(yàn)所用的樣品池是四面透光的石英池，拿取的時候用手指掐住池體的上角部，不能接觸到四個面，清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對其四個面進(jìn)行輕輕擦拭。
3.在測試樣品時，注意熒光強(qiáng)度范圍的設(shè)定不要太高，以免測得的熒光強(qiáng)度超過儀器的測定上限。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要及時的清理臺面，處理廢液，清洗和放置好樣品池，將下次要用的溶液放回冰箱，并且按規(guī)定登記實(shí)驗(yàn)記錄，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。
分光光度計的具體使用方法：
?。?）儀器預(yù)熱。打開樣品室蓋（光門自動關(guān)閉）。開啟電源，指示燈亮，儀器預(yù)熱20min。選擇開關(guān)置于“T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”。
?。?）旋動波長手輪，把所需波長對準(zhǔn)刻度線。
?。?）將裝有溶液的比色皿放置比色架中，令參比溶液置于光路。
（4）蓋上樣品室蓋，調(diào)節(jié)透光率“100％T”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0T”。（如顯示不到100％T，則可加按一次。
?。?）吸光度A的測量：儀器調(diào)T為0和100％后，將選擇開關(guān)轉(zhuǎn)換至A調(diào)零旋鈕，數(shù)字顯示應(yīng)為“.000”。然后拉出拉桿，使被測溶液置入光路，數(shù)字顯示值即為試樣的吸光度A。
?。?）測定完畢后，先打開樣品室蓋，再斷電源。比色杯應(yīng)清洗干凈后，再貯放保存。
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