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液相色譜法測定乙蒜素的含量 液相色譜常見問題解決方法

時(shí)間:2020-07-24    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

   乙蒜素為我國S創(chuàng)綠色農(nóng)藥,是一種植物仿生農(nóng)藥,可抑制糧油、棉花、蔬菜、花卉、藥材、茶葉等作物以及蠶業(yè)、漁業(yè)的數(shù)十種病菌。殺菌效果優(yōu)越、活性穩(wěn)定、與植物親和力強(qiáng),容易被作物吸收,快速殺滅病菌且易降解,不易產(chǎn)生抗性。

  乙蒜素目前已廣泛應(yīng)用于防治水稻爛秧病、惡苗病、稻瘟病、白葉枯??;麥類黑穗病、條紋?。幻藁菸?、黃萎?。还麡漭喖y病、炭疽病;作物苗期立枯病、猝倒病、爛根病等。乙蒜素還能刺激作物生長、壯根壯苗。隨著科技的發(fā)展和人們對乙蒜素認(rèn)識的不斷提高,乙蒜素的使用范圍將會不斷擴(kuò)大,用量日增,市場前景廣闊。

   本文采用反相液相色譜法,使用C18反相柱和紫外可見光檢測器,對乙蒜素原藥中有效成分進(jìn)行定量分析,得到良好結(jié)果。該方法具有操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn),能為乙蒜素的生產(chǎn)質(zhì)量控制和分析方法提供參考。

儀器準(zhǔn)備

 

儀器簡介

    LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等,實(shí)行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。

 

應(yīng)用領(lǐng)域

化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析

 

譜條件:

 

色譜柱

Promosil-C18(150mm×4.6mm,5μm)

檢測波長

210nm

流動(dòng)相

乙腈-水(30:70,V/V)

流速

  1.0mL/min

 進(jìn)樣量

 5μL


 

測定結(jié)果

    液相色譜等度系統(tǒng)氣泡故障排除
    現(xiàn)象描述:
    1. 故障原因:溶劑混合時(shí),由于兩種液體熱力學(xué)體積的變化,會產(chǎn)生氣泡;混合時(shí)放熱或者吸熱易產(chǎn)生氣泡,比如:甲醇和水混合屬于放熱,乙腈和水混合屬于吸熱。通常用量筒混合后明顯看到體積的增減,而且有許多小氣泡產(chǎn)生,掛在瓶壁上,或者晃一下可以看到許多小氣泡存在液體中。
    故障排除:對溶劑過濾,超聲脫氣(常用),尤其是乙腈和水混合后,超聲脫氣時(shí)間要長一些,也可以通過其他方法脫氣,例如安裝在線脫氣機(jī),充氮脫氣等。處理好的液體在使用過程中應(yīng)該保持室內(nèi)溫度恒定。
    2. 故障原因:溶劑濾頭污染,導(dǎo)致泵在吸液過程中吸力不均勻而強(qiáng)制吸液從而產(chǎn)生微小的真空氣泡。此時(shí)會觀察到進(jìn)液管壁上分布許多很小的氣泡,有的在動(dòng)有的停留在管壁上,或者感覺流速比設(shè)定值小,壓力也不穩(wěn)。
    故障排除:先觀察現(xiàn)象確認(rèn),再排除。 用5%—10%的稀硝酸浸泡過夜(怕超聲的濾頭)或者超聲處理數(shù)小時(shí)(可以超聲的濾頭),然后用純水浸泡過夜或者超聲處理,注意換水多處理幾次,洗掉酸的殘留,后用有機(jī)相甲醇浸泡處理或者超聲即可。若上述處理未果,需更換新的溶劑濾頭。
    3. 故障原因:流動(dòng)相放好后,沒有排氣,就開始運(yùn)行泵,易產(chǎn)生氣泡。
    故障排除:放好流動(dòng)相后,打開旁通閥,用注射器慢慢吸液,觀察進(jìn)液管無氣泡后再吸10ml將流路中的空氣驅(qū)趕干凈,旋緊旁通閥后再運(yùn)行泵,或者是打開旁通閥大流速排液,觀察進(jìn)液管無氣泡后,再排氣2min將流路中的空氣驅(qū)趕干凈,旋緊旁通閥后再運(yùn)行泵。
    4. 故障原因:單向閥或者泵頭內(nèi)部污染。(泵的壓力波動(dòng)一般在100psi以上就要考慮了)泵頭是壓力變化劇烈的地方,也是易產(chǎn)生氣泡的地方,泵頭靠負(fù)壓而吸液,而負(fù)壓必然使流動(dòng)相中的小氣泡長大,當(dāng)泵腔變正壓時(shí),已長大的氣泡未必能全部變小流入后續(xù)液路,則泵腔內(nèi)將積存氣泡,從而影響吸液精度。
    故障排除:小心拆下泵頭,用甲醇超聲清洗單向閥以及內(nèi)部密封圈和泵頭整體,用棉花沾甲醇擦拭柱塞桿。必要時(shí)更換單向閥,密封圈,柱塞桿等。
    5. 故障原因:進(jìn)樣時(shí)帶入氣泡,吸樣時(shí)帶到進(jìn)樣針中氣泡
    故障排除:在進(jìn)樣前,注意排出進(jìn)樣針里的空氣,將進(jìn)樣針頭垂直向上,用手指墊上濾紙摁住針頭處,往上推,氣泡很容易就上去了,排出即可。
    6. 故障原因:色譜柱進(jìn)氣泡
    故障排除:用純甲醇低流速(0.2-0.3ml/min)長時(shí)間沖洗反相色譜柱,隨后可逐步加大流速,加到1ml/min,直至色譜柱壓力穩(wěn)定?;蛘吒鼡Q色譜柱。
    7. 故障原因:流通池是易積存氣泡的地方,其對基線影響較大,流動(dòng)相流入色譜柱后,壓力越來越小,微小氣泡將逐漸長大,而流通池截面積相對較大,則氣泡在池內(nèi)易長大,在無外壓的情況下,很難縮小到管路內(nèi)徑以下流出流通池,從而存在了池內(nèi),導(dǎo)致基線很亂。
    故障排除:在廢液出口處加反壓調(diào)節(jié)器(壓力一般在150psi左右),為流通池提供一個(gè)背壓;其次是用手指堵廢液管出液端,眼看泵柱壓上升(約2-3s),松開,且同時(shí)看檢測器顯示屏上吸光度值的變化。如果池內(nèi)有氣泡,則手指堵廢液管,吸光度值將劇烈變化,當(dāng)手松開后吸光度值再次大步上升,證明池內(nèi)有氣泡但沒有排掉,當(dāng)手指堵住和松開廢液管時(shí),吸光度值基本不變時(shí),證明排汽泡成功,再觀察基線將穩(wěn)定(此過程需要重復(fù)10-20次)。

液相色譜柱填裝程序

  液相色譜柱、特別是高效液相色譜柱的填裝,需要有較高的技巧和熟練的技能。因此,有人甚至將“裝柱”看作是“藝術(shù)加技術(shù)”。但是,只要掌握了一些基本的規(guī)律和方法,任何實(shí)驗(yàn)室都可以填裝出具有較高柱性能的色譜柱。當(dāng)然,目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室多是購買商品預(yù)填裝柱來滿足分離、分析之需。但是在一些有特殊需要的情況下,或?yàn)楣?jié)省經(jīng)費(fèi),在實(shí)驗(yàn)室中自行填裝高效液相色譜柱還是可取的。

  液相色譜柱填裝程序中應(yīng)該注意的問題:

 ?、俑邏翰僮鞯陌踩珕栴}。常發(fā)生的問題是柱子與勻漿罐連接不牢,造成加壓時(shí)柱頭被高壓沖下或柱子從勻漿罐上滑脫。此時(shí),輕則填裝失敗,材料損失,重則造成人身傷害事故,一定要加以防范。除每次填裝前均須仔細(xì)確認(rèn)是否連接正確且牢靠外,可以還可加上由法蘭盤和長螺桿組成的預(yù)防脫落裝置,以防萬一。

 ?、谕ǔ?,先填裝的柱床較后填裝的柱床緊密。因此,當(dāng)使用時(shí)宜以相反的方向?yàn)橐?,即讓近勻漿罐一端作為使用時(shí)流動(dòng)相的出口,而填裝時(shí)的出口端則作為流動(dòng)相的入口。

 ?、坌轮邮褂们皯?yīng)以甲醇沖洗20-30min, 后,再改用流動(dòng)相平衡。

 ?、苄轮右诉x適宜的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行評價(jià)并記錄,以備存查和比較。

標(biāo)簽: 液相色譜柱
液相色譜柱 液相色譜柱填裝程序_液相色譜柱

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