高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢。近年來，在保健食品功效成分、營養(yǎng)強(qiáng)化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測定等應(yīng)用廣泛。世界上約有80％的有機(jī)化合物可以用HPLC來分析測定。
高效液相色譜的分離過程HPLC，借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。
高效液相色譜儀操作步驟：
1)過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2)對抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開HPLC工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀)，連接好流動(dòng)相管道，連接檢測系統(tǒng)。
4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。
5)一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過10ml/min。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。
7)設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊newmethod。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。
8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9)關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個(gè)高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實(shí)現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成，用途廣泛；
可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動(dòng)相和固定相都是液體。
流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。
當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，高效液相色譜儀報(bào)價(jià)，服從于高效液相色譜計(jì)算公式；
6種定量計(jì)算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計(jì)算法。
高效液相色譜儀特點(diǎn)：
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，編輯、存貯60個(gè)梯度方法，運(yùn)行復(fù)雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動(dòng)式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動(dòng)排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù)，可延長密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨(dú)特的散熱技術(shù)，高效的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動(dòng)補(bǔ)償；完整的預(yù)清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長調(diào)節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定，全封閉集成型光電檢測元件，無需任何機(jī)械部分調(diào)整即可選擇或改變波長；
6、光源運(yùn)行時(shí)間在線監(jiān)測并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點(diǎn)參數(shù)校正，保障了極高的流量準(zhǔn)確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，可通過PC機(jī)及泵控制；
9、實(shí)時(shí)顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測器具有自動(dòng)波長定位調(diào)整，自動(dòng)調(diào)零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺(tái)監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動(dòng)化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時(shí)間。
1、流動(dòng)相的抽濾要求
色譜純試劑，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動(dòng)相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時(shí)須按其安裝的反相放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時(shí)，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時(shí)一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動(dòng)進(jìn)樣器
平時(shí)應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時(shí)可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進(jìn)行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機(jī)可重啟計(jì)算機(jī)；不正常運(yùn)行時(shí)，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機(jī)上重新插撥接口、重新安裝軟件。
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