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液相色譜儀不規(guī)則的基線噪音是如何產(chǎn)生的 液相色譜常見問題解決方法

時(shí)間:2020-07-25    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

原因     

①漏液。    

②流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成    

③流動(dòng)相各溶劑不相溶    

④檢測器/記錄儀電子元件的問題    

⑤系統(tǒng)內(nèi)有氣泡    

⑥檢測器內(nèi)有氣泡    

⑦流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。)    

⑧檢測器燈能量不足    

⑨色譜柱填料流失或阻塞    

⑩流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常

解決方法    

①檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。     

②檢查流動(dòng)相的組成。    

③選擇互溶的流動(dòng)相     

④斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。     

⑤用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)     

⑥清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器     

⑦用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池     

⑧更換燈     

⑨更換色譜柱     

⑩維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),建議不使用泵的混合裝置 

  液相色譜作為一個(gè)既能用于微量組分的分析測定,又能用于大量的制備分離的儀器,具有靈活多樣的特點(diǎn),其應(yīng)用范圍已超過其他各種分離方法,尤其在中藥樣品的分析分離方面更為突出。而液相色譜在使用過程中容易出現(xiàn)一些問題,如果不對這些問題進(jìn)行解決,就可能會(huì)影響分析結(jié)果,從而影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)。因此,今天我們就來討論一下液相色譜使用過程中可能會(huì)出現(xiàn)的問題。
 
  在液相色譜使用過程中,比較常見的主要有柱壓異常(包括過高或者過低)、峰形異常、基線漂移等。下面我們就來討論一下這幾個(gè)問題的原因和解決方法。
 
  1、柱壓異常
 
  柱壓異常包括過高與過低。柱壓過高是常見的問題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí),我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。
 
  2、峰形異常
 
  1)所有峰均為負(fù)峰。解決方法:信號(hào)電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒;光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
  2)所有峰均為寬峰。解決方法:系統(tǒng)未達(dá)到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
  3)色譜圖中未出峰。解決方法:系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解;泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確;檢測器設(shè)置不正確;針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。
  4)一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰。解決方法:流動(dòng)相吸收本底高;進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
  5)所出峰比預(yù)想的小。解決方法:樣品黏度過大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測器設(shè)置不正確;定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。
  6)出現(xiàn)雙峰或肩峰。解決方法:進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高;保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞;保護(hù)拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
  7)前伸峰。解決方法:進(jìn)樣量或樣品濃度高;溶解樣品的溶劑較流動(dòng)相極性強(qiáng);保護(hù)柱或色譜柱污染或失效。
  8)拖尾峰。解決方法:柱超載,降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾,對樣品進(jìn)行清潔過濾;調(diào)整流動(dòng)相;硅羥基作用,加入三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值;柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效,更換燒結(jié)不銹鋼;加在線過濾器,對樣品進(jìn)行過濾;死體積或柱外體積過大,將連接點(diǎn)降至最低;盡可能使用內(nèi)徑較細(xì)的連接管;柱效下降,更換柱子;采用保護(hù)柱,對柱子進(jìn)行再生。
  9)出現(xiàn)鬼峰。解決方法:進(jìn)樣閥殘余峰,在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物,改進(jìn)樣品的預(yù)處理;流動(dòng)相污染,更換新流動(dòng)相,盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用,隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾;盡可能使用HPLC級(jí)試劑;流路中有小的氣泡,打開Purge閥,加大流速排除。
  10)出現(xiàn)平頭峰。解決方法:檢測器設(shè)置不正確;進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高。
 
  3、基線漂移
 
  一般說來,機(jī)器剛起動(dòng)時(shí),基線容易漂移,大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間,如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長下(220nm)平衡時(shí)間相對會(huì)比較長,但如果你在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,則你要考慮下面的原因:
  1)流通池被污染或有氣體。解決方法:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(斷開柱子更好)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸);
  2)柱溫波動(dòng)。解決方法:控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱;
  3)紫外燈能量不足。解決方法:更換新的紫外燈;
  4)檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。解決方法:將波長調(diào)整至最大吸收波長處;
  5)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。解決方法:檢查流動(dòng)相的組成,使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑;
  6)樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。解決方法:使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間。在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子;
  7)流動(dòng)相的PH值沒有調(diào)節(jié)好。解決方法:加適量的酸或堿調(diào)至合適PH值。
 
  總的來說,在遇到問題時(shí),需要按照排除法依次確定導(dǎo)致問題的原因,之后要做的就是修正和調(diào)整并且記錄問題,只要做好這樣的工作就不怕以后會(huì)出現(xiàn)問題。



    安捷倫液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。

    安捷倫液相色譜儀的常見故障及解決方法:

    1、柱壓高

    可能原因以及解決辦法:

    (1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)。先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速?zèng)_洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘。

    (2)樣品污染沉積。由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

    2、指示

    可能原因以及解決辦法:

    (1)泵密封墊圈磨損。更換密封墊圈

    (2)大量氣泡進(jìn)入泵體。在泵作用的同時(shí),用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

    3、不穩(wěn)定

    原因:系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。

    解決辦法:處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底,避免吸入空氣,流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

    4、峰分叉

    可能原因以及解決辦法:

    (1)色譜柱被污染。先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

    (2)柱頭填料塌陷。擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

    5.重復(fù)性差

    可能原因以及解決辦法:

    (1)進(jìn)樣閥漏液。更換進(jìn)樣閥墊圈

    (2)加樣針不到位。保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。

    (3)液量不足。







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