液相色譜法(HPLC)是目前應(yīng)用廣泛的分析、純化、分離有機(jī)化合物的有效方法之一。 當(dāng)今社會(huì)中約有80%的已知有機(jī)化合物能用液相色譜法分離、分析，而且由于此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合熱穩(wěn)定性差、氣化揮發(fā)困難、沸點(diǎn)高的有機(jī)化合物和生命物質(zhì)。液相色譜儀經(jīng)常應(yīng)用于環(huán)境分析、食品分析、生命科學(xué)、分子生物學(xué)、臨床藥品檢測(cè)分析等領(lǐng)域。
液相色譜儀由溫度控制系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、高壓輸液泵等組成，是利用被檢測(cè)物在兩種液體之間分配比的差異，對(duì)被檢測(cè)物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
通用儀器作為國(guó)內(nèi)液相色譜儀的品牌一直堅(jiān)持研發(fā)生產(chǎn)出更好更準(zhǔn)確的液相色譜儀。他的液相色譜儀產(chǎn)品都擁有自己的技術(shù)以及產(chǎn)權(quán)。具有：壓力實(shí)時(shí)檢測(cè)顯示，高壓限、低壓限報(bào)警，隨系統(tǒng)壓力變化流速自動(dòng)補(bǔ)償?shù)墓δ?；以及確保檢測(cè)器低噪聲、低漂移、超高靈敏度、提高了圖譜的分辨能力和準(zhǔn)確率的能力。
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任何顆粒物進(jìn)進(jìn)液相色譜儀后都會(huì)在柱子進(jìn)口端被篩板擋住，zui后的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預(yù)防 措施，包括操縱步驟和商品儀器自身的各種過(guò)濾設(shè)計(jì)，努力防止或減少顆粒物進(jìn)進(jìn)液相色譜儀中，從而延長(zhǎng)儀器和色譜柱的使用壽命，并進(jìn)步數(shù)據(jù)的可靠性。
在液相色譜儀中，顆粒物的主要來(lái)源有三個(gè)途徑：活動(dòng)相、被測(cè)樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1、被測(cè)樣品
使用針筒式過(guò)濾器不可能100%得到通過(guò)過(guò)濾器的被測(cè)樣品，總會(huì)或多或少的丟失。丟失來(lái)自這樣幾方面：過(guò)濾器濾膜的吸附、過(guò)濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過(guò)濾器與針筒連接處的滲漏等?！ ?br /> 2、活動(dòng)相
無(wú)論是液相色譜儀HPLC級(jí)的水還是在實(shí)驗(yàn)室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，zui后一步也是通過(guò)0.2μm微孔濾 膜。任何一種緩沖液中加進(jìn)了固體物，必然活動(dòng)相過(guò)濾將。少量雜質(zhì)顆粒存在于活動(dòng)相中必然成為殘?jiān)?br />
解決辦法：2. 1.活動(dòng)相制備僅采用HPLC級(jí)液體時(shí)不需要過(guò)濾，反之所有活動(dòng)相組成在使用前必須過(guò)濾。
2.2在連接儲(chǔ)液瓶和泵的輸液管的末端進(jìn)口采用下沉式過(guò)濾器（常見(jiàn)材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種）也是很重要的。這個(gè)過(guò)濾器的規(guī)格為≥10μm的微孔物質(zhì)，所以它不能取代活動(dòng)相過(guò)濾步驟，但是它能除往系統(tǒng)中的塵土并保證儲(chǔ)液瓶、輸液管使用的可靠性。
2.3.推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個(gè)0.45 或0.5μm的在線(xiàn)多孔過(guò)濾器，接在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護(hù)柱。這個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板， 既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線(xiàn)過(guò)濾，液相色譜儀檢測(cè)每批樣品開(kāi)始前記錄下壓力值，當(dāng)壓力上升一定值，例如25%或增加 500psi，應(yīng)該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復(fù)到原來(lái)的壓力值。
3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物
zui后，在液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個(gè)主要來(lái)源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。
3.1、在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊?！ ?/span>
3.2、原裝密封墊的密封效果，更換以后輕易引起活動(dòng)相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。
?1、色譜柱的使用說(shuō)明：
（1）色譜柱使用前注意事項(xiàng)：
色譜柱的儲(chǔ)存液無(wú)特殊說(shuō)明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。
?。?）流動(dòng)相：
流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水可以是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDS C18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。
?。?）樣品：
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
2、色譜柱的保存
?。?）反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：
使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
?。?）長(zhǎng)期保存色譜柱：
如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以?xún)?chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以?xún)?chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以?xún)?chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度可以是室溫。
3、色譜柱的再生
因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來(lái)說(shuō)可能是柱效下降。
?。?）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
?。?）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。
4、色譜柱在使用過(guò)程中易出現(xiàn)的問(wèn)題和解決辦法
色譜柱在使用中較為常見(jiàn)的問(wèn)題就是柱壓升高，如果柱壓是在長(zhǎng)時(shí)間使用過(guò)程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過(guò)程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見(jiàn)原因及解決辦法：
?。?）色譜柱頭的過(guò)濾篩板堵塞或污染；
解決方法：如確定是色譜柱頭的過(guò)濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
?。?）色譜柱頭的填料被樣品污染；
解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
?。?）色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出；
解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
?。?）流動(dòng)相PH值過(guò)大或過(guò)小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決方法：如果因PH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
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