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安捷倫液相色譜儀常見故障及相應(yīng)解決方法 液相色譜常見問題解決方法

時間:2020-07-25    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

一、液相色譜儀峰分叉怎么回事?

  造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染,或柱頭填料塌陷導致的。

  對于*種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。

  對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

  二、如何排除液相色譜儀氣泡溢出的故障?

  流動相內(nèi)產(chǎn)生都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡,主要是因為過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。

  過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

  三、自檢時,為什么有時會出現(xiàn)“鎢燈能量低”的錯誤?

  一般來說,原因是系統(tǒng)中有擋光物,光路偏離,鎢燈電源系統(tǒng)或鎢燈燈泡已壞。這時首先要檢查光度室是否有擋光物;打開檢測器光源室蓋,檢查氘燈是否點亮;如果氘燈不亮,則關(guān)機,更換新氘燈,換時,需注意型號;檢查氘燈保險絲,看是否松動、氧化、燒斷;如果故障,應(yīng)立即更換;再開機重新自檢;若仍出現(xiàn)上述故障,則重新安裝軟件后再進行自檢。

  四、出現(xiàn)壓力波動大,流量不穩(wěn)定該怎么辦?

  造成這種情況的原因是系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

  五、液相色譜儀峰面積重復性不好怎么回事?

  主要原因可能有進樣閥漏液、加樣針不到位或液量不足。針對*種情況,處理時應(yīng)對更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。

  六、液相色譜儀液相色譜柱壓升高的原因是什么?

  造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了異常的占位性物體,造成流體阻力加大所引起的。例如,緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi),或樣品污染沉積。針對*種情況,處理時應(yīng)先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

  【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進入檢測器進行檢測,從而實現(xiàn)對試樣的分析。如今,該方法已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。尤其是在藥物分析領(lǐng)域,有著廣泛的應(yīng)用。
 
  液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用,主要考慮試樣的預處理和分析柱、檢測器的選擇。在試樣的預處理上,日前興起的固相(微)萃取使得許多含量低的成分得到精制提純,從而適于液相色譜的測定。中藥中有些紫外吸收,或無特征紫外吸收的成分,直接用液相色譜測定,其靈敏度和分離度都不盡人意,利用柱前或柱后衍生化法可使這些成分較地測定出來。對于極性大、脂溶性差物質(zhì),在YWGCl8柱上不易保留,用十二烷基磺酸鈉作為離子對試劑,降低其極性,延長柱上的保留時間,取得較好的分離較果。
 
  將液相色譜和質(zhì)譜這兩個強有力的分析技術(shù)在線連接在一起,經(jīng)過三十年的發(fā)展已成為一項較為成熟的分析手段,但是它從形成伊始就存在著問題:從液相色譜流進質(zhì)譜時,流動相的變化、溶劑的組成、高溫高壓離子化的問題制約著這種聯(lián)用技術(shù)發(fā)展。大氣壓離子化接口具有去除溶劑和離子化的雙重功效,它的引入使得該技術(shù)在各個領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。電噴霧離子源是一種軟電離技術(shù),一般只生成(M H) 和(M-H)-兩種分子離子峰,選擇性監(jiān)測(mz)190的負分子離子峰,具有較高的靈敏度、準確度、專一性,滿足了低濃度藥物研究的需求。
 
  三維液相色譜法可以同步測定葛根素和阿魏酸兩種指標。通過實驗證明:如果選擇合適的柱溫等色譜條件,乙醇作為反相液相色譜流動相,分析中藥及中成藥中有效成分,既安全又準確。結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì),普通的檢測器難以檢測出來,液相色譜-電化學法可以有效地測定黃連粉中僅差一個基團的黃芩苷和黃芩素的含量。樣品經(jīng)色譜柱分離后收集,再經(jīng)熒光分光光度計測熒光強度,影響因素多,測定復雜。改進后的液相色譜-熒光法則可以不經(jīng)衍生化和收集分離物,只經(jīng)化學處理除雜,濃縮后直接進樣即可。用該法測定貫葉連翹中金絲桃素的含量也取得了較好的結(jié)果。液相色譜-示差折光測黃芪精口服液中黃芪甲苷的含量也都取得了較為滿意的結(jié)果。對于只有紫外末端吸收,用紫外檢測時靈敏度低,基線易漂移,示差折光檢測其易受外界條件干擾,蒸發(fā)散射檢測器能克服以上不足,響應(yīng)值只與樣品質(zhì)量有關(guān),其信號相應(yīng)與質(zhì)量成正比,不同化合物,質(zhì)量相同則信號相應(yīng)基本一致。蒸發(fā)光散射檢測法是基于不揮發(fā)樣品分子對光的散射程度與其質(zhì)量成正比,與其所含基團性質(zhì)無關(guān)。只要選擇適當?shù)臋z測器參數(shù),便可使流動相和溶劑完全氣化,不產(chǎn)生信號,而樣品中的各個組分以不揮發(fā)粒子存在,對光有散射,以被檢測出來。因此,蒸發(fā)光散射檢測器可用于含不同基團的多組分同時分離、分析。和紫外、熒光等方法相比,蒸發(fā)光散射檢測法對不同物質(zhì)有近似相同的響應(yīng)因子。
 
  在談到藥用輔料檢測中的其他液相色譜檢測方法時,液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)作為微量元素測定的有效途徑之一,液相色譜高分離度與電感耦合等離子體質(zhì)譜低檢測性、寬動態(tài)線性范圍及能同時測定多種元素、跟蹤元素的變化等特點融合,目前已廣泛的用于食品、環(huán)境、體內(nèi)外藥物分析中微量元素的測定。該方法應(yīng)用于藥用輔料中微量元素砷、汞、鉻等檢測的探索性研究項目已在試驗室開展。目前雖罕見相關(guān)報道,隨著技術(shù)的成熟與儀器的發(fā)展,其在藥用輔料檢測中有著廣泛的應(yīng)用前景。同時,液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)因儀器昂貴,核磁共振靈敏度相對較低,液相色譜需使用氘代溶劑,溶劑信號易對樣品產(chǎn)生干擾等,使其在藥物分析中廣泛應(yīng)用存在一定障礙,但核磁共振在結(jié)構(gòu)分析方面有獨特的優(yōu)勢,能夠提供豐富的結(jié)構(gòu)信息,彌補液相色譜通用檢測器只能得到非常有限的結(jié)構(gòu)信息的不足,在實際藥用輔料雜質(zhì)分析中已進入使用階段。
 
  綜合上述研究成果可以知曉,目前液相色譜法在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用是多方面的。而且為了滿足特定的檢測需求,液相色譜與多種其他方法、其他儀器聯(lián)合,不斷改進自身缺陷,為藥物分析提供更佳的解決方案。相信這項技術(shù)在未來還會有更廣闊的應(yīng)用空間。



    安捷倫液相色譜儀常見問題及相應(yīng)的解決方法:

    一、安捷倫液相色譜儀常見問題——柱壓高

    原因分析以及解決辦法:

    (1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)。先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下 降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘。

    (2)樣品污染沉積。由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,換成甲醇沖洗,接著用甲 醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子,再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

    二、安捷倫液相色譜儀常見問題——不穩(wěn)定

    原因分析以及解決辦法:

    原因:系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。

    解決辦法:處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

    三、安捷倫液相色譜儀常見問題——指示

    原因分析以及解決辦法:

    (1)泵密封墊圈磨損。更換密封墊圈

    (2)大量氣泡進入泵體。在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

    四、安捷倫液相色譜儀常見問題—— 重復性差

    原因分析以及解決辦法:

    (1)進樣閥漏液。更換進樣閥墊圈

    (2)加樣針不到位。保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài) 轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。

    (3)液量不足。

    五、安捷倫液相色譜儀常見問題——峰分叉

    原因分析以及解決辦法:

    (1)色譜柱被污染。先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的 長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

    (2)柱頭填料塌陷。擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹 鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。







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