一般來(lái)說(shuō)，果膠是由D-半乳糖醛酸以a-1,4糖苷鍵連接形成的鏈狀雜多糖，其中，部分D-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇所酯化形成甲酯。但是，亞麻纖維中的果膠具有一定的特殊性，其多聚半乳糖醛酸主鏈和側(cè)鏈上都含有鼠李糖殘基，而且主鏈?zhǔn)罄钐菤埢线B接著主要由β-1,4-D-半乳聚糖組成的較長(zhǎng)側(cè)鏈。國(guó)內(nèi)外對(duì)于亞麻纖維果膠的類型和結(jié)構(gòu)特征鮮見(jiàn)報(bào)道。
單糖的檢測(cè)常采用紫外或熒光試劑進(jìn)行衍生后再用色譜方法進(jìn)行分離檢測(cè)以提高檢測(cè)靈敏度。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）作為柱前衍生試劑，其優(yōu)點(diǎn)在于反應(yīng)條件溫和，無(wú)需酸催化，不會(huì)引起去唾液酸化作用，產(chǎn)物無(wú)立體異構(gòu)體，在245nm處有強(qiáng)烈的紫外吸收，已經(jīng)成功用于單糖及低聚糖的分離分析。本文以混合單糖的峰面積為指標(biāo)，確定了單糖Z佳衍生條件，并在此條件下對(duì)水解的亞麻纖維果膠進(jìn)行分析，獲得了亞麻纖維果膠的單糖組成，為亞麻纖維果膠的綜合利用提供理論依據(jù)。
儀器準(zhǔn)備
儀器簡(jiǎn)介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測(cè)器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺(tái)P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測(cè)器及恒溫柱箱等，實(shí)行多元高壓洗脫、波長(zhǎng)掃描等功能。
應(yīng)用領(lǐng)域
化合物檢測(cè)、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測(cè)、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
色譜條件：
柱溫 | 30℃ |
檢測(cè)波長(zhǎng) | 245nm |
流動(dòng)相 | 0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值6.7）：乙腈（V/V）=83:17 |
流速 | 1.0mL/min |
進(jìn)樣量 | 20μL |
測(cè)定結(jié)果：
首先從常規(guī)的幾個(gè)部件做個(gè)簡(jiǎn)單的分析。
(一)輸液泵應(yīng)具備如下性能：
?、賀SD(流量穩(wěn)定性)<0.3%;
?、诹髁糠秶鷮?，0.1～5.0ml/min內(nèi)連續(xù)可調(diào)，有的實(shí)驗(yàn)則需要更大流量;
?、圯敵鰤阂话銘?yīng)能達(dá)到150~400kg/cm2,流量越大,最高壓力越低;
④液缸容積小,有助于減少流動(dòng)相死體積，利于清洗。
⑤密封性能好，耐腐蝕。
(二)檢測(cè)器
?、僮贤鈾z測(cè)器，分為可變單波長(zhǎng)檢測(cè)器VWD和二極管陣列檢測(cè)器DAD，可以檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)
?、?font data-color="#0268CA">熒光檢測(cè)器，檢測(cè)有熒光的物質(zhì)
?、垡暡钫酃鈾z測(cè)器，通用型檢測(cè)器，但對(duì)環(huán)境要求極為苛刻，而且靈敏度低
④ELSD，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
⑤MSD，質(zhì)譜檢測(cè)器
常用的是紫外檢測(cè)，然后是MSD和ELSD
(三)色譜柱
要求柱效高、選擇性好，分析速度快等。目前市場(chǎng)上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。
一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬(wàn)的柱子。
因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)基本能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。所以要根據(jù)自己實(shí)際情況來(lái)選擇合適的柱子。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到較佳效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
此外，溫度在色譜分析中是個(gè)不容忽視的環(huán)境條件，環(huán)境溫度對(duì)溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動(dòng)相的粘度都有影響。而且不同的檢測(cè)器對(duì)溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)而言是個(gè)絕對(duì)不容忽視的條件，因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(四)進(jìn)樣器
進(jìn)樣裝置要求：密封性好，重復(fù)性好，死體積小，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進(jìn)樣方式多種多樣，可分為隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。自動(dòng)進(jìn)樣器則是市場(chǎng)發(fā)展的趨勢(shì)。
(五)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
一般專業(yè)的液相色譜儀生產(chǎn)廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數(shù)據(jù)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)計(jì)算處理。進(jìn)口軟件價(jià)格比較高，這個(gè)自己得根據(jù)資金選擇了。
色譜柱在使用前，可以進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測(cè)試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測(cè)試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同?！?i> 1、樣品的前處理； a、可以使用流動(dòng)相溶解樣品； b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)； c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)?！ ?i>2、流動(dòng)相的配制 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)： a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中（或長(zhǎng)期留在柱中）； b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)； c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長(zhǎng)泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）； d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器，可以使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制； e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行； f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè)，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用?！ ?i>3、流動(dòng)相流速的選擇 因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳?！ ‘?dāng)選用較佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）?！ ∽⒁猓骸 .含水流動(dòng)相可以在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過(guò)夜?？梢约尤氙B氮化鈉，防止細(xì)菌生長(zhǎng)； b.流動(dòng)相要求使用0.45μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì)； c.使用HPLC級(jí)溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
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