A、 沒有壓力顯示,沒有流動相流動
原因
解決方法
1、電源問題
1、接通電源,開機
2、保險絲被燒壞
2、更換保險絲
3、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗
3、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定
b、修理或更換控制器
4、柱塞桿折斷
4、更換柱塞桿
5、泵頭內(nèi)有空氣
5、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣
6、流動相不足
6、a、補充流動相
b、更換入口濾頭
7、單向閥損壞
7、更換單向閥
8、漏液
8、擰緊或更換手緊接頭
B、 流動相流動正常,但沒有壓力顯示
原因
解決方法
1、儀表損壞
1、更換儀表
2、壓力傳感器損壞
2、更換壓力傳感器
C、 壓力持續(xù)偏高
原因
解決方法
1、流速設(shè)定過高
1、調(diào)整流速設(shè)定
2、柱前篩板堵塞
2、a、在允許情況下反沖色譜柱
b、更換篩板
c、更換色譜柱
3、流動相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀
3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃酉?/P>
b、沖洗色譜柱
4、色譜柱選擇不當(dāng)
4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱
5、進樣閥損壞
5、清洗或更換進樣閥
6、柱溫過低
6、提高溫度
7、控制器失常
7、修理或更換控制器
8、保護柱阻塞
8、清洗或更換保護柱
9、在線過濾器阻塞
9、清洗或更換在線過濾器
D、 壓力持續(xù)偏低
原因
解決方法
1、流速設(shè)定過低
1、調(diào)整流速
2、系統(tǒng)漏液
2、確定漏液位置并維修
3、色譜柱選擇不當(dāng)
3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱
4、柱溫過高
4、降低溫度
5、控制器失常
5、維修或更換控制器
E、 壓力波動
原因
解決方法
1、泵中有氣體
1、a、溶劑脫氣
b、從泵中除去氣體
2、單向閥損壞
2、更換單向閥
3、泵密封損壞
3、更換泵密封
4、脫氣不充分
4、a、溶劑脫氣
b、改變脫氣方法(使用在線脫氣法等)
5、系統(tǒng)漏液
5、確定漏液位置并維修
6、使用梯度洗脫
6、由于流動相粘度的變化引起的壓力波動
高效液相色譜儀(HPLC)現(xiàn)已成為有機化學(xué)分析的重要手段之一。同樣,在食品分析中,無論是殘留分析還是成分分析,HPLC也已成為不可或缺的分析儀器。和其它分析儀器一樣,你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù),首先你要保養(yǎng)好它,使它處于一個良好的待機狀態(tài),這樣你操作它進行分析時就可以比較順利地獲得理想的結(jié)果。 流動相脫氣對于避免HPLC系統(tǒng)出問題,順利得到一個理想的數(shù)據(jù)是一個很有效的措施。HPLC系統(tǒng)內(nèi)是不能夠有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時要產(chǎn)生很大的壓力,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當(dāng)氣泡存在時,你將觀察到瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限,泵將停止工作。有些泵設(shè)計可以很好地排除氣泡,而也有一些泵設(shè)計當(dāng)氣泡存在時將停止運轉(zhuǎn)。 常用的脫氣方法有如下幾種: 1、吹氦脫氣法?! ±煤庠谝后w中溶解度比空氣低的特性,在0.1MPa壓力下,以約60 mL/min流速通入流動相儲液容器中10~15min,可以很有效地從流動相中排除溶解的空氣,能排除接近80%的氧氣。采用一個高效分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作。這種脫氣方法雖然好,但我們國內(nèi)氦氣價格較高,很少有實驗室采用此方法?! ?、加熱回流法?! 〈朔ǖ拿摎庑Ч^好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會丟失,混合流動相的比例會有變化?! ?、抽真空脫氣法。 此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化,從而影響到實驗的重現(xiàn)性,因此多用于單溶劑體系的簡單分析?! ?、超聲波脫氣法。 將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗器中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果最差?! ?、在線脫氣法?! ‖F(xiàn)在商品的HPLC儀器,均可配在線脫氣機。在線脫氣使用簡單,低故障,有效。建議購買儀器時一定要購買,有的公司是作為選購件,所以與儀器公司談配置時應(yīng)與公司確認。
色譜柱是高效液相色譜的心臟,在高效液相色譜儀的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透性,延長柱子的使用壽命非常重要。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì),造成流體阻力加大所致。這兩個原因,大致又可以分為以下幾方面:
1、流動相的前處理
雜質(zhì)堵塞色譜柱進口濾片,導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動相可能沒有過濾,或過
濾不徹底,使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。
2、樣品的沉淀
當(dāng)溶解樣品的溶劑與流動相不一致時,樣品進入色譜柱時,可能因溶解度降低而沉淀出來,
造成壓力升高。
3、晶體的析出
使用含有緩沖液的流動相時,緩沖液中的無機鹽可能會殘留在體系之中,它們會因在新流動
相中的溶解度降低而析出,造成流體阻力加大、壓力升高。
4、細菌或霉菌孳生
霉菌在流動相中、管路中或柱子進口處繁殖、生長堵塞濾板,導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷
酸鹽緩沖液時一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。
5、溶質(zhì)吸附
當(dāng)溶質(zhì)在柱子上有較強的吸附,且所用的流動相難以將它們洗脫時,累積的未洗脫溶質(zhì)也會
造成阻力增大和壓力升高。
6、流動相更換過度較快
當(dāng)改變流動相體系時,不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動相存在于同一個體系之中,也會造成壓力升高。
7、壓力脈沖
運行過程中,有時會產(chǎn)生系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的
崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化,填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大,造成壓力升高。
處理對于緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)的情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;
對于樣品污染沉積的情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。