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熒光分光光度計的結構和主要部件 光度計是如何工作的

時間:2020-08-05    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
熒光分光光度計常用的檢測器是光電倍增管,但要進行光學多通道檢測時則需要如光導攝像管等多道檢測器?! ?BR>  光導攝像管是一種真空管,由一個稱為靶的光敏區(qū)和另一個讀取信號的電子槍組成,而靶又由眾多的光二極管系列組成。光陰極受到光照射時發(fā)射的光電子被象聚焦柵和陽極加速并成像于靶上,靶上的光電二極管產(chǎn)生電子和空穴的電荷載流并迅速移向兩極,從而把光量子數(shù)記錄下來。隨后用電子束掃描管靶,把光量子信號輸送到計算機的存貯器中累積和記錄,最后在顯示盤、記錄儀或陰極射線管示波器上顯示出來。
  【儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】紫外分光光度法是利用物質(zhì)對紫外光譜區(qū)域內(nèi)的光具有選擇性吸收的現(xiàn)象,對物質(zhì)進行定性和定量分析的方法 。用于測量和記錄待測物質(zhì)分子對紫外光的吸光度及紫外吸收光譜,并進行定性定量以及結構分析的儀器,稱為紫外吸收光譜儀或紫外分光光度計。
 
  維護與保養(yǎng)
 
  (1)儀器工作電源一般為 220V,允許有±10%的電壓波動。為保持電源燈和檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性,在電源電壓波動較大的實驗室,應該配備穩(wěn)壓器。
 
  (2)儀器室溫度應控制在 18℃~30℃,濕度 30~60%。
 
  (3)為了延長光源使用壽命,在不使用時不要開光源燈。若工作間歇時間短,可不關燈或停機。一旦停機,必須待燈冷卻后再重新啟動,并預熱15min。如燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應及時更換。更換時不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污黏附。若不小心接觸過,要用無水乙醇擦試。
 
  (4)比色皿使用完畢,立即用溶劑沖洗4~5次。若仍不能沖洗干凈,先用乙醇沖洗(如銅、鐵、錳、鋅的測定),再用純化水或有機溶液沖洗干凈(注:比色皿的沖洗,切忌溶劑是有機溶劑時,用畢直接用水沖洗,會造成溶質(zhì)析出, 附著在皿內(nèi)壁),并用擦鏡紙把水吸干。
 
  (5)每天操作使用結束后,應仔細檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出,若有溢出必須隨時用濾紙吸干,否則會引起測量誤差或影響儀器使用壽命。
 
  (6)儀器使用一段時間(一般每年1~3次),用鈥濾光片檢查波長準確度。
 
  (7)儀器使用前或搬動后應檢查并校正波長精度。
 
  (8)儀器每次使用完畢,應及時罩上防塵罩,在罩內(nèi)放入數(shù)袋硅膠,以免受潮積塵。
 
  (9)當鹵鎢燈“泡殼”上出現(xiàn)嚴重發(fā)黑或燒毀,或者氘燈的燈絲折斷或漏氣時,要及時更換新燈。
紫外分光光度計的選擇因素

    紫外分光光度計是實驗室普及率很高的一種光譜儀器,由于靈敏度高、選擇性好、準確度高、適用濃度范圍廣,而且分析成本低、操作簡便、快速得到廣泛的應用,長期在分析領域扮演很重要的角色。

    在選擇這類儀器時要考慮哪些因素呢?

    1、光學構造(OPTICALCONFIGURATION)

    一般來說,紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結果。

    雙光束型則是通過一個斬光輪(mirroredchopperwheel)將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品。

    可以最小化光漂移(lampdrift)和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。

    因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。

    2、光源和檢測方法(LIGHTSOURCESANDDETECTION)

    分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細菌的生長情況。

    例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進行ELISAs分析和比色分析。

    紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學和半導體研究需要的光譜范圍。

    VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是這樣的儀器。

    一些儀器具有多種光源供選擇:

    紫外光、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm)。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。

    分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的光譜。

    一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。

    為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管

    PMTs提供快速的反應時間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。

    3、樣品類型(SAMPLEFORMAT)

    在大部分的樣品類型中,分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求。

    但盡管對于小實驗室來說,制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間。

    用小試管cuvette裝樣品容量一般從1μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。

    4、數(shù)據(jù)管理(DATAMANAGEMENT)

    大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,通常與PC機一起聯(lián)用,需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。

    另外一個值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的最終使用。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結果。

    例如一些藥物機構需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價機構的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式。

標簽: 紫外分光光度計
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