分光光度計的使用步驟主要有哪些?
以下相關工程師做如下介紹：
1.把分光光度計電源線連接好，儀器的電源具備接地功能;
2.接通電源后，按動開機開關，然后讓儀器預熱至少20分鐘；
儀器會自動校正，然后顯示546.0nm 0.000A說明自檢結束，就可以開始測試;
3.使用“方式”鍵測試的方式，再根據(jù)自己要測量的結果選透光率、吸光度、和濃度的測試;
4.要對波長進行分析，選擇按鍵6，然后按提示依次進行;
5.把樣品溶液和要測定的溶液各自倒入比色皿中后；
然后打開樣品蓋，把盛著溶液的比色皿插入另一個比色皿中，最后蓋好樣品蓋;
6.把參比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”鍵；
這時的顯示器會顯示出BLANKING,，直到最后顯示出“100%T”或者是“0.000A”為止;
7.最后儀器顯示出“100%T”或者是“0.000A”即可結束測試。
這時被測樣品的透光度、吸光度等參數(shù)就可直接讀出;
8.分光光度計使用完畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
分光光度計的使用注意事項：
1、分光光度計應放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。
熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定;
2、分光光度計使用前，使用者應該首先了解分光光度計的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。
在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固；
通電也要良好，各個調節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。
3、在分光光度計尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上；
若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節(jié)。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
蛋白質的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質，一般要消除320nm的“背景”信息，設定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，較佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實驗中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因為Warburg公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結果很不穩(wěn)定。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質的干擾，如DNA的干擾;另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的混合物，比色法測定的基礎是蛋白質構成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應，產(chǎn)生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數(shù)目直接相關，從而反應蛋白質濃度。
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