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淺析酶標(biāo)儀的四個詳細(xì)分類 酶標(biāo)儀如何操作
時間:2020-08-07 來源:儀多多儀器網(wǎng) 作者:儀多多商城
酶標(biāo)儀的詳細(xì)分類:
1.光吸收酶標(biāo)儀:是用來進(jìn)行可見光與紫外光吸光度的檢測,特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系,由此可以用來定性和定量的檢測,光吸收的檢測技術(shù)成熟,成本低,操作簡單,但是動態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強,一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源,而紫外/可見酶標(biāo)儀是可以將兩種光源進(jìn)行切換,適應(yīng)不同測量波長的需求。
2.熒光酶標(biāo)儀:是用來進(jìn)行熒光的檢測,通過激發(fā)光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質(zhì)標(biāo)定的樣品上后,會發(fā)出波長更長的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達(dá)檢測器,熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例,熒光檢測靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣,但是容易受外界干擾,激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響,干擾檢測。
3.化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀:是來自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型,輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間;閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強,需要應(yīng)用自動加樣器才可以進(jìn)行,化學(xué)發(fā)光中發(fā)出的光子數(shù)與樣品量呈一定比例關(guān)系,化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀靈敏度非常高,動力學(xué)范圍廣,
4.多功能酶標(biāo)儀:是以上三種酶標(biāo)儀的集合,它集成了兩種或者三種酶標(biāo)儀于一體,可以同時進(jìn)行光吸收,熒光和化學(xué)發(fā)光的檢測,功能強大,使用范圍廣,可作為研究平臺,避免了重復(fù)購買,是實驗室的理想選擇,另外根據(jù)通道的個數(shù),可以將酶標(biāo)儀分為單通道和多通道兩種類型,單通道又有自動和手動兩種之分。
【
儀器網(wǎng) 采購指南
】接下來小編為大家分享下如何來選購酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實驗結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用,使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛,同時促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目,如:乙肝五項、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法,報出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如:某弓形蟲檢測試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對照品的OD值×2.5,通過目測無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國內(nèi)多家機構(gòu),如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強調(diào)酶標(biāo)儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀,并提供酶標(biāo)儀測定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn),由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
光是電磁波,波長100nm~400nm稱為紫外光, 400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收了光中的紅色光譜。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
檢測單位:
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算:
E=OD=C×D×E
C為檢測物的濃度
D為檢測物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收較多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測,稱為測量波
長。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下,檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
Anthos 酶標(biāo)儀檢測值計算
儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號,最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中,檢測物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計算如下:
T=(Meas—Min)/(Max—Min)
其中T為透光值, Meas為檢測的二進(jìn)位數(shù)值, Min為在 0%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值, Max為在100%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值,舉例如下:
MaX=3600 Mn=20 Meas=30
T=(30-20)/3600-20)=0.0028
OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552
Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
儀器會自動對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位,中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時,儀器其實要進(jìn)行35個點的測量,選取最中間的5個點的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
酶標(biāo)儀的用途和其它提示
用于ELISA試劑的測定,廣泛用于各種實驗室,包括臨床實驗室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的,請按照試劑盒的 說明書要求進(jìn)行。
檢測結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測試劑的體積,都會造成OD值的不同,因此, 只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進(jìn)行。
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