熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同，它不是通過普通光源的照明觀察標(biāo)本，而是利用一定波長(zhǎng)的光(通常是紫外光、藍(lán)紫光)激發(fā)顯微鏡下標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)，使之發(fā)射熒光，所以，熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明，而是作為一種激發(fā)標(biāo)本的內(nèi)熒光物質(zhì)的能源。我們之所以能觀察標(biāo)本，是由于光源的照明，而是標(biāo)本內(nèi)熒光物質(zhì)吸收激發(fā)的光能后所呈現(xiàn)的熒光現(xiàn)象。
　　
　　由此可知，熒光顯微鏡的特點(diǎn)，主要是它的光源能供給大量特定波長(zhǎng)范圍的激發(fā)光，使受檢標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)能獲得必要強(qiáng)度的激發(fā)光。同時(shí)，熒光顯微鏡必須具備相應(yīng)的濾光鏡系統(tǒng)。
　　
　　熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學(xué)的基本工具。它是由超高壓光源、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)、光學(xué)系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成(圖3-12)，是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光。
　　
　　激發(fā)熒光的方式：按光的波長(zhǎng)范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍(lán)紫光)兩種。UV激發(fā)法是用短于400nm的近紫外光進(jìn)行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光，容易判別標(biāo)本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。
　　
　　BV激發(fā)法是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍(lán)光進(jìn)行激發(fā)。該方法使用藍(lán)光照射標(biāo)本，所以熒光觀察系統(tǒng)的截止濾光片必須使用可完全阻斷藍(lán)光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對(duì)于激發(fā)光的極大吸收波長(zhǎng)和熒光的極大發(fā)光波長(zhǎng)比較接近，所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍(lán)光作為激發(fā)光，所以熒光色素的吸收效率較高，可得到較明亮的圖像。其缺點(diǎn)是500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上的使整個(gè)圖像顯黃色。在熒光抗體法中，大多以熒光色素特有的顏色來判斷其特異性，所以在討論微妙的特異性時(shí)，上述BV激發(fā)法的缺點(diǎn)往往影響極大。
　　
　　綜上所述，熒光顯微鏡的照明可根據(jù)聚光器的構(gòu)造和激發(fā)光的波長(zhǎng)按以下三點(diǎn)考慮。
　　
　?、?gòu)臒晒庀竦姆床钜髞砜?，UV激發(fā)暗場(chǎng)聚光器照明可以。
　　
　　②以像的亮度來考慮，BV激發(fā)濾光片暗場(chǎng)觀察效率最高。
　　
　?、踀V激發(fā)濾光片暗場(chǎng)觀察和BV激發(fā)暗場(chǎng)聚光器照明的特性，可看作介于這兩種照明方法之間，但前者濾光片暗場(chǎng)的性質(zhì)較強(qiáng)，顯示圖像較明亮，反差小；后者因保留暗場(chǎng)光路的性質(zhì)，故顯示圖像較暗，而反差有所改善。當(dāng)實(shí)際使用熒光顯微鏡時(shí)，應(yīng)采用比較適合標(biāo)本要求的照明法進(jìn)行觀察。
　　
　　必須指出，即使像反差較佳的UV激發(fā)暗場(chǎng)聚光器照明，由標(biāo)本折射或散射的部分紫外激發(fā)光也會(huì)進(jìn)入物鏡，這樣在光學(xué)系統(tǒng)中的加拿大膠膠合面和光學(xué)玻璃因激發(fā)引起的自身熒光會(huì)使像的反應(yīng)變壞。因此，必須在目鏡前面使用紫外吸收濾光片作為截止濾光片。

顯微鏡包括兩大部分，分別是顯微鏡的機(jī)械裝置和顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)，下面具體介紹這兩個(gè)部分
（一）顯微鏡的機(jī)械部分

1．鏡筒  為顯微鏡上部圓形中空的長(zhǎng)筒，筒口上端安裝目鏡，下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連。作用是保護(hù)成像的光路與亮度。

2．轉(zhuǎn)換器　固著在鏡筒下端，分兩層，上層固著不動(dòng)，下層可自由轉(zhuǎn)動(dòng)。轉(zhuǎn)換器上有2～4個(gè)圓孔，用來安裝不同倍數(shù)的低倍或高倍物鏡。

3．粗準(zhǔn)焦螺旋　位于鏡臂的上方，可以轉(zhuǎn)動(dòng)，以使鏡筒能上下移動(dòng)，從而調(diào)節(jié)焦距。

4．細(xì)準(zhǔn)焦螺旋　位于鏡臂的下方，它的移動(dòng)范圍較粗準(zhǔn)焦螺旋小，可以細(xì)調(diào)焦距。

5．鏡座　是位于鏡臂的下方，顯微鏡的底部，呈馬蹄形的金屬座。用以穩(wěn)固和支持鏡身。

6．鏡柱　從鏡座向上直立的短柱。上連鏡臂，下連鏡座，可以支持鏡臂和載物臺(tái)。

7．傾斜關(guān)節(jié)　鏡柱和鏡臂交界處有一個(gè)能活動(dòng)的關(guān)節(jié)。它可以使顯微鏡在一定的范圍內(nèi)后傾（一般傾斜不得超過45°）便于觀察。但是在使用臨時(shí)封片觀察時(shí)，禁止使用傾斜關(guān)節(jié)，尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用，以免污損鏡體。

8．載物臺(tái)　從鏡臂向前方伸出的金屬平臺(tái)。呈方形或圓形，是放置玻片標(biāo)本的地方。其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一個(gè)彈性的金屬壓片夾，用來壓住載玻片。較高級(jí)的顯微鏡，在載物臺(tái)上常具有推進(jìn)器，它包括夾片夾和推進(jìn)螺旋，除夾住切片外，還可使切片在載物臺(tái)上移動(dòng)。

（二）顯微鏡光學(xué)部分

1．目鏡　它是安裝在鏡筒上端的鏡頭。是由一組透鏡組成的，它可以使物鏡成倍地分辨、放大物像，例如 5×、10×、15×、20×。

2．物鏡　是決定顯微鏡質(zhì)量的關(guān)鍵部件。安裝在轉(zhuǎn)換器的孔上，也是由一組透鏡組成的，能夠把物體清晰地放大。一般有三個(gè)放大倍數(shù)不同的物鏡，即：低倍物鏡（8×或10×）、高倍物鏡（40×或45×）和油浸物鏡（90×或100×），根據(jù)需要可選擇一個(gè)使用。顯微鏡的放大倍數(shù)是目鏡倍數(shù)乘以物鏡的倍數(shù)。

3．反光鏡　在聚光器的下面有一個(gè)一面平另一面凹的雙面圓鏡?？勺鞲鞣N方向的翻轉(zhuǎn)，光線較強(qiáng)時(shí)使用平面鏡，反之使用凹面鏡。

4．聚光器　（學(xué)生用顯微鏡一般沒有這個(gè)裝置）是由凹透鏡組成的，它可以集中反光鏡投射來的光線。在鏡柱前面有一個(gè)聚光器調(diào)節(jié)螺旋，它可以使聚光器升降，用以調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱，下降時(shí)明亮度降低，上升時(shí)明亮度加強(qiáng)。

5．虹彩光圈　又稱可變光闌，由多數(shù)金屬片組成（學(xué)生用顯微鏡一般沒有這個(gè)裝置），在較高級(jí)的顯微鏡上具有此裝置。使用時(shí)移動(dòng)其把柄，可控制聚光器 透鏡的通光范圍，用以調(diào)節(jié)光的強(qiáng)度。虹彩光圈下常附有金屬圈，其上裝有濾光片，可調(diào)節(jié)光源的色調(diào)。

6．遮光器　簡(jiǎn)單的顯微鏡無聚光器和虹彩光圈，而裝有遮光器。遮光器呈圓盤狀，上面有大小不等的圓孔（光圈）。光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔，可以調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱。

顯微鏡的成像原理（放大原理）

光線→反光鏡→遮光器→通光孔→標(biāo)本（一定要透明）→物鏡的透鏡（第一次放大成倒立實(shí)像）→鏡筒→目鏡（再放大成虛像）→眼。