菌落計(jì)數(shù)器在皮氏培養(yǎng)皿上計(jì)算微生物的數(shù)目是一件非常耗時(shí)的工作。有了菌落計(jì)數(shù)器這種儀器，用戶就不必為這項(xiàng)復(fù)雜的操作費(fèi)心了，它可廣泛應(yīng)用在每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室中。
菌落計(jì)數(shù)器基本操作一般包括：樣品的稀釋--傾注平皿--培養(yǎng)48小時(shí)--計(jì)數(shù)報(bào)告
1．操作方法：培養(yǎng)到時(shí)間后，計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的菌落數(shù)。可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)，計(jì)算處原始樣品中每克（或每ml）中的菌落數(shù)，進(jìn)行報(bào)告。
2．到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于0－4℃，但不得超過(guò)24h。
3．計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)在30~300之間的平板（SN標(biāo)準(zhǔn)要求為25~250個(gè)菌落），若有二個(gè)稀釋度均在30~300之間時(shí)，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法要求應(yīng)以二者比值決定，比值小于或等于2取平均數(shù)，比值大于2則其較小數(shù)字（有的規(guī)定不考慮其比值大小，均以平均數(shù)報(bào)告）。
4．若所有稀釋度均不在計(jì)數(shù)區(qū)間。如均大于300，則取較高稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如均小于30，則以最低稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如菌落數(shù)有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之間，則應(yīng)以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則應(yīng)按小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報(bào)告之。有的規(guī)定對(duì)上述幾種情況計(jì)算出的菌落數(shù)按估算值報(bào)告。
5．不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比（同一稀釋度的二個(gè)平板的菌落數(shù)應(yīng)基本接近），即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少，稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈多。如出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，則應(yīng)視為檢驗(yàn)中的差錯(cuò)（有的食品有時(shí)可能出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，如酸性飲料等），不應(yīng)作為檢樣計(jì)數(shù)報(bào)告的依據(jù)。
6．當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，如呈鏈狀生長(zhǎng)的菌落之間無(wú)任何明顯界限，則應(yīng)作為一個(gè)菌落計(jì)，如存在有幾條不同來(lái)源的鏈，則每條鏈均應(yīng)按一個(gè)菌落計(jì)算，不要把鏈上生長(zhǎng)的每一個(gè)菌落分開(kāi)計(jì)數(shù)。如有片狀菌落生長(zhǎng)，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個(gè)平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù)。
7．當(dāng)計(jì)數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過(guò)多（即所有稀釋度均大于300時(shí)），但分布很均勻，可取平板的一半或1/4計(jì)數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。
8．菌落數(shù)的報(bào)告，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定菌落數(shù)在1~100時(shí)，按實(shí)有數(shù)字報(bào)告，如大于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算。固體檢樣以克（g）為單位報(bào)告，液體檢樣以毫升（ml）為單位報(bào)告，表面涂擦則以平方厘米（cm2）報(bào)告。
菌落計(jì)數(shù)器由計(jì)數(shù)器、探筆、計(jì)數(shù)池等部分組成，計(jì)數(shù)器采用CMOS集成電路精心設(shè)計(jì)，LED數(shù)碼管顯示，字高13mm，清晰明亮，配合專用探筆，計(jì)數(shù)靈敏準(zhǔn)確，菌落對(duì)比清楚。便于觀察?？蓮V泛用于食品、飲料、藥品、生物制品、化妝品、衛(wèi)生用品、飲用水、生活污水、工業(yè)廢水、臨床標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)的檢驗(yàn)。那么菌落計(jì)數(shù)器都是怎樣進(jìn)行計(jì)數(shù)的呢？上海巴玖來(lái)為您詳細(xì)講解菌落計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)方法。
1.計(jì)數(shù)器測(cè)定法
即用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據(jù)計(jì)數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計(jì)算樣品中的含菌數(shù)。本法簡(jiǎn)便易行，可立即得出結(jié)果（本法不僅適于細(xì)菌計(jì)數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計(jì)數(shù)）。
2.電子計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法
電子計(jì)數(shù)器的工作原理是測(cè)定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過(guò)一個(gè)細(xì)胞，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過(guò)這個(gè)小孔時(shí)，電阻明顯增加，形成一個(gè)脈沖，自動(dòng)記錄在電子記錄裝置上。
該法測(cè)定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識(shí)別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。
3.活細(xì)胞計(jì)數(shù)法
常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法，是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長(zhǎng)出一個(gè)菌落的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測(cè)污染活菌數(shù)的方法，也是目前國(guó)際上許多國(guó)家所采用的方法。使用該法應(yīng)注意：①一般選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，過(guò)多或過(guò)少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗(yàn)，是經(jīng)常用的活菌計(jì)數(shù)法。
4.比濁法
比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計(jì)測(cè)定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。
此法簡(jiǎn)便快捷，但只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對(duì)的細(xì)菌數(shù)目，對(duì)顏色太深的樣品，不能用此法測(cè)定。
5.測(cè)定細(xì)胞重量法
此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。此法適于菌體濃度較高的樣品，是測(cè)定絲狀真菌生長(zhǎng)量的一種常用方法。
6.測(cè)定細(xì)胞總氮量或總碳量
氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測(cè)定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。
7、顏色改變單位法（colour change unit,簡(jiǎn)稱CCU）
這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無(wú)法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無(wú)法用比濁法來(lái)計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來(lái)計(jì)數(shù)微生物的相對(duì)含量的。
全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)器因其計(jì)數(shù)準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度高、可留存樣品信息、使用方便，一般可在數(shù)秒內(nèi)統(tǒng)計(jì)出樣品菌落數(shù)、性價(jià)比高等優(yōu)點(diǎn)，而受到眾多企業(yè)、醫(yī)院、科研院所的喜愛(ài)，但是由于全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)器的科技含量較高，如果選型出現(xiàn)問(wèn)題，對(duì)日后的檢驗(yàn)、科研工作會(huì)帶來(lái)很大不便，所以建議的辦法就是在挑選時(shí)一定要挑選一臺(tái)滿足使用需求的菌落計(jì)數(shù)器，那如何選購(gòu)一款優(yōu)質(zhì)的菌落計(jì)數(shù)器呢?
一、根據(jù)實(shí)際使用需求來(lái)確定CCD傳感器的檔次
很多用戶偏向于選擇像素高的菌落計(jì)數(shù)器，卻沒(méi)考慮到檢驗(yàn)和科研的實(shí)際應(yīng)用需求，所以用戶在選購(gòu)前就要確定好自己要買多少像素的CCD傳感器。
二、看圖像采集通道功能，指標(biāo)越多越好
所謂"圖像采集通道"，就是菌落計(jì)數(shù)器對(duì)于樣品信息的獲取能力，也就是標(biāo)志著菌落計(jì)數(shù)器開(kāi)始計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)前的初始信息是否真實(shí)可靠。如果圖像采集通道功能過(guò)于單一，那當(dāng)后期計(jì)數(shù)時(shí)時(shí)會(huì)很容易出現(xiàn)誤判，所以"圖像采集通道"指標(biāo)越多越好。指標(biāo)響應(yīng)時(shí)間越小，則標(biāo)志著該菌落計(jì)數(shù)器獲取樣品信息的能力越強(qiáng)。
三、看最小菌落分辨率為多少
一般入門級(jí)菌落計(jì)數(shù)器最小菌落分辨率多半有0.1mm左右的效果，中等機(jī)型有0.05mm的水準(zhǔn)，若實(shí)際比較入門、高階機(jī)型的圖檔顯示能力，擁有高分辨率的計(jì)數(shù)器，在菌落較小時(shí)效果會(huì)更明顯。
四、看有沒(méi)有數(shù)據(jù)及報(bào)表管理功能
在選購(gòu)菌落計(jì)數(shù)器時(shí)一定要選有具有數(shù)據(jù)及報(bào)表管理功能的設(shè)備，于由微生物的不可復(fù)檢性，對(duì)于以往檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的管理和回溯極為重要，不然在實(shí)際開(kāi)展工作時(shí)繁雜的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)和報(bào)表管理會(huì)耗盡科研人員的精力。
五、不要指標(biāo)高的，就要效果好的
現(xiàn)在有些菌落計(jì)數(shù)器在給用戶介紹時(shí)，會(huì)宣傳他們的產(chǎn)品有多少多少功能，多高多高的指標(biāo)，實(shí)際上等真正買回家，根本用不到這么多功能，比較重要的還是要統(tǒng)計(jì)菌落的實(shí)際效果好不好，不能為了過(guò)多的功能而買一個(gè)效果不是很好的設(shè)備。而統(tǒng)計(jì)效果的好壞關(guān)鍵在于算法是否合理。
六、看使用是否方便
全自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)器的一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)在于它降低了人工統(tǒng)計(jì)菌落的工作量，減輕了工作人員的工作強(qiáng)度，但由于菌落形態(tài)和樣品狀態(tài)的不確定性，市面上大多數(shù)菌落計(jì)數(shù)器都較為強(qiáng)調(diào)通過(guò)人工干預(yù)來(lái)提高準(zhǔn)確度。用戶在選購(gòu)設(shè)備時(shí)應(yīng)注意操作是否簡(jiǎn)便、是否符合工作人員的操作習(xí)慣和操作思路。一般來(lái)說(shuō)，需要的人工干預(yù)越小，使用越簡(jiǎn)便。
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