液相色譜柱都是按照嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)和測(cè)試的，如能按照以下信息使用和維護(hù)色譜柱，不但能得到更佳的檢測(cè)結(jié)果，更能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
色譜柱的安裝：
1、首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進(jìn)樣閥、柱子、檢測(cè)器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線，同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器之間連接管線的長(zhǎng)度。安裝色譜柱之前，確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對(duì)分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱。
2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)較好的連接效果，應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來(lái)的接頭長(zhǎng)期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。
3、使用PEEK材料的通用接頭，只需用手?jǐn)Q緊不需要特定扳手，使用壓力為5000psi；使用溫度不得超過(guò)100℃。
流動(dòng)相平衡：
1、在進(jìn)行樣品檢測(cè)前，至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相一定要使用色譜級(jí)別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細(xì)菌產(chǎn)生。
2、流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,消除流動(dòng)相中顆粒對(duì)色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應(yīng)重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱，以免柱性能損壞（添加5％的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱，同時(shí)可以達(dá)到對(duì)緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡）。
3、流動(dòng)相需脫氣后使用，可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測(cè)器的工作不正常。如果測(cè)試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區(qū)別，應(yīng)該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結(jié)晶造成對(duì)色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(zhǎng)的平衡時(shí)間。
樣品制備與操作：
1、樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中。除特殊指明外，如使用強(qiáng)溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低。
2、樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過(guò)濾器對(duì)樣品預(yù)先過(guò)濾。頻繁改變流動(dòng)相組成，會(huì)加速降低柱效。
3、色譜柱由高壓勻漿法裝填，能承受較高壓力。為獲得較好分離效果，使用時(shí)請(qǐng)不要超過(guò)200kgf，而且避免壓力突然上升或變化，否則會(huì)造成硅膠填料的破壞，減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外較高操作溫度不要超過(guò)60℃。
保存色譜柱：
1、如果流動(dòng)相含有酸或無(wú)機(jī)鹽，應(yīng)當(dāng)先用去離子水（20倍柱體積）沖洗干凈。然后用用100％乙腈或甲醇保存色譜柱。最后用柱子的接頭密封，并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放。
2、應(yīng)避免色譜柱受到直接的機(jī)械沖擊或摔落，避免造成色譜柱性能的降低。
色譜柱的再生：
1、用相當(dāng)于20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子，建議按柱子的箭頭方向沖洗，盡可能不反沖：沖洗時(shí)使用的的參考溶劑順序是水、甲醇、氯仿、異丙醇、甲醇。
在日常分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
1、柱子在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙。
2、如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析，樣品種類不多，但分析次數(shù)比較多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。
3、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)對(duì)柱內(nèi)填料產(chǎn)生沖擊力，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。
4、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/p>
5、使用柱溫箱時(shí)，應(yīng)注意在流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后才能開啟柱溫箱升溫。
6、一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
7、選擇使用適宜的流動(dòng)相，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
8、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
9、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí)，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過(guò)渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。
10、保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿色譜級(jí)的乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對(duì)禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置一個(gè)晚上或更長(zhǎng)時(shí)間。
11、色譜柱使用過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
12、在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般30分鐘以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。
在液相色譜分離系統(tǒng)中，色譜填料選擇的正確與否會(huì)直接影響到專業(yè)的液相色譜柱分離物質(zhì)效果的好壞。由于液相色譜填料具有相當(dāng)寬的選擇范圍，所以我們?cè)谫?gòu)買液相色譜柱之前有必要對(duì)不同液相色譜填料進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單的認(rèn)識(shí)和了解。
第一、正相色譜硅膠基質(zhì)填料。
正相色譜柱的固定相是由硅膠和其他具有極性官能團(tuán)組成的鍵合相填料。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較弱組合最先被色譜柱沖洗出來(lái)。而且正相色譜所使用的流動(dòng)相其極性要低于固定相，流動(dòng)相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。
第二、反相色譜硅膠基質(zhì)填料。
反向色譜柱的填料是以硅膠材料為主要物質(zhì)，并與極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)組成的鍵合相。其物質(zhì)分離特點(diǎn)是極性較強(qiáng)組合最先被色譜柱沖洗出來(lái)，而極性弱的組分則會(huì)更強(qiáng)的保留在柱子上。反向色譜的流動(dòng)相的極性相對(duì)較強(qiáng)，常配制有機(jī)緩沖液作為流動(dòng)相。目前較為常用的反相色譜填料有C4（B）、C8（MOS）以及C18（ODS）等。
第三、聚合物填料。
這種聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯組成。其特點(diǎn)是這種色譜柱的酸堿度適用范圍相對(duì)較廣，且疏水性很強(qiáng)，但它的柱效相對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料要低一些。一般將這種大孔的基質(zhì)填料用于蛋白質(zhì)的分離。
第四、其他無(wú)機(jī)填料。
如石墨化碳對(duì)于酸堿度和溫度沒用嚴(yán)格的限制范圍，一般可對(duì)一些幾何導(dǎo)構(gòu)體進(jìn)行分離。此外還有氧化鋁以及氧化鋯等無(wú)機(jī)填料的應(yīng)用。
總而言之，如果我們能夠全面系統(tǒng)的了解一下液相色譜柱填料的分類及特點(diǎn)，那么我們?cè)谶x擇購(gòu)買一流的色譜柱時(shí)就可以在一個(gè)相對(duì)較小的范圍內(nèi)順利找到自己所需要的產(chǎn)品。這樣我們就可以在節(jié)省選擇購(gòu)買時(shí)間的同時(shí)，也能快速買到令自己滿意的色譜柱。
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