培養(yǎng)箱使用注意事項(xiàng)
1、從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開(kāi)門時(shí)間和減少開(kāi)門次數(shù)。（注：培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過(guò)過(guò)濾的潔凈空氣。長(zhǎng)時(shí)間敞開(kāi)或頻繁開(kāi)關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。）
2、從培養(yǎng)箱拿取細(xì)胞時(shí)輕拿輕放，動(dòng)作迅速，隨手關(guān)緊培養(yǎng)箱門。未經(jīng)允許，禁止翻看、移動(dòng)他人細(xì)胞或樣品，如有特殊需要的，請(qǐng)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人協(xié)調(diào)。
3、培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過(guò)多乙醇蒸氣。
4、培養(yǎng)箱內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)的放置需整潔有序，方便查找，同時(shí)應(yīng)盡量提高培養(yǎng)箱的使用效率，負(fù)責(zé)人可視實(shí)驗(yàn)情況啟用或停止空培養(yǎng)箱的使用，節(jié)約資源。
5、普通培養(yǎng)中的細(xì)胞，若非實(shí)驗(yàn)特殊需要，每瓶/板細(xì)胞每天只需要觀察生長(zhǎng)狀態(tài)一次，2人以上共用的細(xì)胞，可約好時(shí)間一起觀察。（注：頻繁將細(xì)胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時(shí)也會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)條件的恒定。）
6、實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)常注意檢查培養(yǎng)箱溫度、CO2氣體量是否相符設(shè)定值。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)的增濕盤，定期更換無(wú)菌水并進(jìn)行消毒。密切注意培養(yǎng)箱內(nèi)情況，如出現(xiàn)霉變、菌斑、支原體和衣原體感染或其他明顯染菌跡象，應(yīng)立即通知管理員及其它使用者。

　　
二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞的作用

　　
原代培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)不可避免地存留少量異質(zhì)細(xì)胞一同生長(zhǎng)．為了后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的針對(duì)性和準(zhǔn)確性，一般都需要對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行純化。純化神經(jīng)元的方法有很多種，簡(jiǎn)便及常用的是采用有絲分裂抑制劑阿糖胞苷來(lái)抑制異質(zhì)細(xì)胞的存活和生長(zhǎng)。神經(jīng)元的分化增殖完成于胚胎期，大部分神經(jīng)元在出生后即為分裂后細(xì)胞，但其他細(xì)胞則仍然不斷地進(jìn)行分裂增殖，使用有絲分裂抑制劑后，非神經(jīng)元的細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到抑制及淘汰，神經(jīng)元由此得到純化實(shí)驗(yàn)材料：Hanks液，DMEM培養(yǎng)基10ml，有刻度吸管兩只，彎頭吸管兩只，無(wú)刻度吸管一只，新生乳鼠（24小時(shí)）0.05%胰酶，1%雙抗，10%胎牛血清，培養(yǎng)皿，小燒杯，空的離心管，鑷子，剪刀，酒精燈，酒精棉，實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：肥皂洗手，新吉爾滅擦手，開(kāi)通風(fēng)柜，將吸管從套筒中取出放入各自對(duì)應(yīng)的試管內(nèi)，將橡皮塞安裝到各自吸管上，酒精燈分別迅速灼燒，1配液Hanks液近40ml加1%雙抗1ml，加完雙抗的小吸管留作計(jì)數(shù)，在DMEM培養(yǎng)基中加10%胎牛血清（已配好，全部加入），從離心管取一滴碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至溶液呈紫色，一離心管0.05%胰酶，

　　取材。乳鼠新生24小時(shí)。3，洗滌剪碎，在培養(yǎng)皿中加入少許Hanks液洗滌，將乳鼠頭部用酒精棉擦拭消毒，在乳鼠頭部位置剪一個(gè)工字型切口，將皮膚顱骨沿著切口依次剪開(kāi)剝離，取出大腦組織，并去除乳鼠的血管腦膜，用彎頭吸管將Hanks液與剝離干凈的腦組織移走到另一個(gè)干凈的培養(yǎng)皿中，用彎頭吸管洗走洗液，彎頭吸管將含有腦組織的Hanks移入到小燒杯中剪碎，每個(gè)組織塊近似一立方毫米，靜置后洗走上面的Hanks液，（吸取Hanks液時(shí)勿將下面的組織塊洗走），同樣方法再用Hanks液洗滌一次4．酶解，加一離心管0.05%胰酶，將上述小燒杯中的組織液移入空置的離心管中，37攝氏度水浴10分鐘，觀察組織塊是否變小，靜置2分鐘，使組織沉淀下來(lái)，棄掉上請(qǐng)胰酶后，加DMEM培養(yǎng)基（全部倒入）來(lái)中和胰酶，吹散組織液5.離心1200轉(zhuǎn)每分鐘，離心5分鐘，棄掉上清液，沉淀后加Hanks液吹散重懸組織液，用同樣的轉(zhuǎn)速和時(shí)間在離心一次，加完全培養(yǎng)基3-4mL吹散，靜置1分鐘，以便消化大塊組織6.計(jì)數(shù)，取0.1ml離心后的細(xì)胞液加入苔盤藍(lán)染色，加樣搶加0.1微升與計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，同時(shí)剩余細(xì)胞液加入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)接種，標(biāo)注好組別和時(shí)間，培養(yǎng)細(xì)胞的名稱37攝氏度，二氧化碳培養(yǎng)箱中，下周實(shí)驗(yàn)課觀察細(xì)胞培養(yǎng)情況。
 

二氧化碳培養(yǎng)箱技巧分析

　　恒溫恒濕培養(yǎng)箱可廣泛用于藥物/紡織/食品加工等無(wú)菌試驗(yàn)，穩(wěn)定性檢查以及工業(yè)產(chǎn)品的原料性能，產(chǎn)品包裝壽命等測(cè)試。具有精確的溫度和濕度控制系統(tǒng)，它為產(chǎn)業(yè)研究、生物技術(shù)測(cè)試提供所需要的各種環(huán)境模擬條件。設(shè)備在后期使用時(shí)，要做好日常的維護(hù)保養(yǎng)工作，下面給大家講講：　　1、檢查超溫保護(hù)器本機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，超溫保護(hù)之設(shè)定最高值加20℃~30℃。試驗(yàn)箱內(nèi)之溫度升至超溫保護(hù)之設(shè)定點(diǎn)時(shí)，加熱器之供電即停止，”O(jiān)VERHEAT”超溫警示燈亮但風(fēng)扇仍運(yùn)轉(zhuǎn)，若長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)轉(zhuǎn)及無(wú)人看管，運(yùn)轉(zhuǎn)前請(qǐng)務(wù)必確實(shí)檢查超溫保護(hù)器，是否設(shè)定妥當(dāng)?（濕球超溫保護(hù)器之設(shè)定為120℃）?！　?、冷凝器灰塵之清除冷凝器應(yīng)定期每月保養(yǎng)，利用真空吸塵器將冷凝器散熱網(wǎng)片上附著之灰塵吸除或利用高壓空氣噴除灰塵。　　3、箱體內(nèi)外部的清潔與保養(yǎng)機(jī)器在操作前應(yīng)先將內(nèi)部雜質(zhì)﹝物﹞清除。配電室內(nèi)每年至少清潔一次以上，清潔時(shí)可利用吸塵器將室內(nèi)灰塵吸除即可。箱體外部每年亦須清洗一次以上，清洗時(shí)先用肥皂水擦拭即可?！　?、濕球水位之檢查與調(diào)整積水筒水位不可過(guò)高，使水溢出積水筒或過(guò)低使?jié)袂驕y(cè)試布吸水不正常，影響濕球的準(zhǔn)確性?水位大約保持六分滿即可。積水筒水位之調(diào)整，可調(diào)整積水盒的高低?！　?、濕球測(cè)試布之更換當(dāng)測(cè)試布表面不干凈或變硬，或于做完溫度控制后，繼續(xù)做溫濕球度控制前都必須更換測(cè)試布。測(cè)試布約三個(gè)月更換一次，更換時(shí)應(yīng)用清潔布擦拭測(cè)溫體，更換新測(cè)試布時(shí)應(yīng)先清洗干凈?！　?、加濕器之檢查與保養(yǎng)加濕器內(nèi)之儲(chǔ)水應(yīng)每月更換一次，確保水質(zhì)清潔，加濕水盤應(yīng)每一個(gè)月清洗一次，確保水流順暢。

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