分光光度計(jì)的基本原理是:物質(zhì)在光的照射下會(huì)產(chǎn)生對(duì)光吸收的效應(yīng),而且物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜。
因此不同波長(zhǎng)的單色光通過溶液時(shí)其光的能星就會(huì)被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,即符合比耳定律。
在使用可見分光光度計(jì)前先了解一下的操作規(guī)程沒有錯(cuò)。
開機(jī)
1、開機(jī)前，檢查電源插座是否接上;
2、啟動(dòng)電源開關(guān)，儀器顯示"723C"
3、儀器經(jīng)自測(cè)后，按"MODE"鍵后再按"2"鍵，儀器顯示"DATA"
基本使用方法
1、按"GO TO λ"鍵，輸入設(shè)定波長(zhǎng);
2、四個(gè)比色皿，其中R位置放置參比試樣，其余三個(gè)放入待測(cè)試樣。將比色皿放入樣品池內(nèi)的比色皿架中，蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路，按"ABS%"鍵，使儀器自動(dòng)調(diào)零和置滿度;
4、然后將待測(cè)試樣推入光路，顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測(cè)試樣的數(shù)據(jù)打印出，只需按"START/STOP"鍵即可。
可見分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)
每天使用結(jié)束后，應(yīng)仔細(xì)檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出，若有溢出必須隨時(shí)用濾紙吸干;
儀器使用完畢，用防塵套罩住。
雙光束紫外-可見分光光度計(jì)（以下簡(jiǎn)稱儀器），系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開關(guān)（斬光器）分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器。
它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響，并能自動(dòng)記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。
儀器在開機(jī)后通常會(huì)做一些自檢，但仍應(yīng)按本規(guī)程進(jìn)行檢定。儀器的波長(zhǎng)范圍包括195~800nm，狹縫為0.1~5nm可調(diào)。
工作原理
紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對(duì)紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進(jìn)行分析的一種儀器分析方法。
這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子能級(jí)的躍遷，它廣泛用于無機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的定性和定量分析。
朗伯一一比耳定律（Lambet-Beer）是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。
當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度（吸收光程）的函數(shù)。
其常用表達(dá)式如下（式中ε為系數(shù)）：
A=ε·c·l
紫外見分光光度計(jì)是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計(jì)的不同，紫外可見分光光度計(jì)可以分為單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。
制定依據(jù)
本規(guī)程主要參照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程《JJG178-2007紫外、可見、近紅外分光光度計(jì)》、《JJF1641-2017紫外可見分光光度計(jì)型式評(píng)價(jià)大綱》及《中國(guó)藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則“0401紫外-可見分光光度法”擬定。
項(xiàng)目及技術(shù)要求
波長(zhǎng)準(zhǔn)確度≤±1.0nm（紫外光區(qū)），≤±2.0nm（500nm附近）；
波長(zhǎng)重復(fù)性≤0.5nm。
基線平直度≤0.01吸光度。
0%線噪聲≤0.1%，100%線噪聲≤0.5%.
吸光度準(zhǔn)確度應(yīng)符合規(guī)定。
雜散光<0.8%。
光譜帶寬≤標(biāo)示帶寬±20%。
吸收池配對(duì)誤差≤0.5%。
檢測(cè)結(jié)果處理
自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者，即為合格，可以使用。若檢測(cè)結(jié)果不符合規(guī)定，應(yīng)重新調(diào)試儀器再進(jìn)行自檢，符合規(guī)定后方可使用。
分光光度法是根據(jù)被測(cè)物質(zhì)分子對(duì)紫外、可見波段范圍單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來進(jìn)行物質(zhì)的定性、定量或結(jié)構(gòu)分析的一種方法。
可見分光光度計(jì)的維護(hù)：
1、保護(hù)光源：光源燈有一定的壽命，儀器不工作時(shí)不要開燈，若工作間歇時(shí)間短，可不關(guān)燈。 一旦停機(jī)，則要待燈冷卻后再重新啟動(dòng)，并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時(shí)，就及時(shí)更換。 經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無水乙醇去除。
2、保證合適的工作環(huán)境溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等；甚至使儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。
3、定期清潔，保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
儀器使用一定時(shí)間后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，建議由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑，最后恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校和記錄。
4、正確使用比色皿拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
清洗比色皿時(shí)，先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機(jī)物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液（1:2）浸泡片刻，再用水沖洗。
每次做完實(shí)驗(yàn)應(yīng)立即洗凈比色皿。比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干，以保護(hù)透光面。
可見分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、使用方便的單光束分光光度計(jì)，基于樣品對(duì)單色光的選擇吸收特性可用于對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量分析。
廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)保監(jiān)測(cè)、食品生產(chǎn)和質(zhì)量控制等部門作定性、定量分析，還可作為大、專院校和中學(xué)相關(guān)課程的教學(xué)演示和實(shí)驗(yàn)儀器。
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