高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)， 在兩相中做相對運(yùn)動(dòng)時(shí)， 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時(shí)， 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。高效液相色譜儀在使用過程中通常會(huì)遇到下面幾個(gè)問題：
1. 色譜柱中的流動(dòng)相會(huì)排干嗎？
不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排 入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。相比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色 譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定 就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶 劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。
2. 使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問題？
如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會(huì)非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。
使 用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會(huì) 變脆。另一個(gè)西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會(huì)超過 3000psi）。
使用PEEK接頭時(shí)則無需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會(huì)使接頭在管路上滑動(dòng)而產(chǎn)生死體積或漏液。
3. 如何預(yù)防液相泵的故障:
要保持泵的良好操作性能,必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對流動(dòng)相進(jìn)行過濾和脫氣.下面列出預(yù)防泵故障的幾項(xiàng)措施:
1).用高質(zhì)量試劑和HPLC級(jí)溶劑；
2).過濾流動(dòng)相和溶劑；
3).脫氣；
4).每天開始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；
5).不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；
6).定期更換墊圈；
7).需要時(shí)加潤滑油；
8).查閱有關(guān)泵操作手冊中的其它建議。
處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動(dòng)小于2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。
為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時(shí)應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險(xiǎn)絲等部件，以及更換工具。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫，也可以拓展為制備系統(tǒng)，采用高壓混合器連接兩個(gè)高壓恒流泵，利用RS232通訊，即可實(shí)現(xiàn)梯度分析；
便于用戶自由選擇與搭配，混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成，用途廣泛；
可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
高效液相色譜儀分離原理：液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動(dòng)相和固定相都是液體。
流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。
當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，高效液相色譜儀報(bào)價(jià)，服從于高效液相色譜計(jì)算公式；
6種定量計(jì)算方法：歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法，高效液相色譜儀適用范圍，以及指數(shù)計(jì)算法。
高效液相色譜儀特點(diǎn)：
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，編輯、存貯60個(gè)梯度方法，運(yùn)行復(fù)雜的梯度程序；
2、泵形式：串聯(lián)雙柱塞 浮動(dòng)式密封圈；泵頭自沖洗功能，泵無須手動(dòng)排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù)，可延長密封圈使用壽命；
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨(dú)特的散熱技術(shù)，高效的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)字過濾；
4、程序化的溶劑類和壓縮因子，可自動(dòng)補(bǔ)償；完整的預(yù)清洗功能，更于快速溶劑更換；
5、波長調(diào)節(jié)功能：既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定，全封閉集成型光電檢測元件，無需任何機(jī)械部分調(diào)整即可選擇或改變波長；
6、光源運(yùn)行時(shí)間在線監(jiān)測并顯示，方便用戶確定光源壽命；
7、三條流量校正曲線以及特有的多點(diǎn)參數(shù)校正，保障了極高的流量準(zhǔn)確性；
8、梯度：高壓2-3元；梯度方式：高壓，梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制，可通過PC機(jī)及泵控制；
9、實(shí)時(shí)顯示樣品池和參比池能量，方便判斷光源和流通池狀態(tài)；
10、紫外檢測器具有自動(dòng)波長定位調(diào)整，自動(dòng)調(diào)零，多量程輸出選擇；
11、智能化高，可實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺(tái)監(jiān)控，提高了你的QC效益；
12、自動(dòng)化，讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時(shí)間。
1、流動(dòng)相的抽濾要求
色譜純試劑，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動(dòng)相不能抽取，則可能是單向閥出現(xiàn)問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時(shí)須按其安裝的反相放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時(shí)，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時(shí)一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動(dòng)進(jìn)樣器
平時(shí)應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時(shí)可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進(jìn)行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機(jī)可重啟計(jì)算機(jī)；不正常運(yùn)行時(shí)，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機(jī)上重新插撥接口、重新安裝軟件。
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