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液相色譜注意事項(xiàng) 液相色譜如何操作

時(shí)間:2020-08-31    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

液相色譜注意事項(xiàng)

1.流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑.
2.流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣.脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到濕溫后使用.
3.長(zhǎng)時(shí)間不使用儀器,應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存.
4.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器.

液相色譜柱的使用方法

  色譜柱在使用前,可以進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

  1、樣品的前處理:

  a、可以使用流動(dòng)相溶解樣品。

  b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

  c、使用0.45?m的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。

  2、流動(dòng)相的配制:

  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):

  a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。

  b、流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

  c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。

  d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。如使用UV檢測(cè)器,可以使用對(duì)紫外吸收較低的溶劑配制。

  e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。

  f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

  3、流動(dòng)相流速的選擇:

  因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對(duì)于一根特定的色譜柱,要追求較佳柱效,可以使用較佳流速。對(duì)內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。

  當(dāng)選用較佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(zhǎng)。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

標(biāo)簽: 液相色譜柱 液相色譜柱 液相色譜柱的使用方法_液相色譜柱   【儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】色譜法的分離原理是溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí),由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,從而先后從固定相中流出的分離過(guò)程,其實(shí)質(zhì)是一個(gè)吸附與解吸附的平衡過(guò)程。
 
  色譜柱與流動(dòng)相的溫度,影響著組分的分離平衡,對(duì)于使用柱溫箱的有益之處我們認(rèn)為有以下幾點(diǎn):
 
  1. 可以使保留時(shí)間相對(duì)恒定,對(duì)需要進(jìn)行的定性鑒別可提高其可信度;
 
  2. 保留時(shí)間相對(duì)恒定是進(jìn)行定量的基礎(chǔ),不同的保留時(shí)間不僅不能判斷其成份的一致性,同時(shí),由于保留時(shí)間不同峰面積也必將發(fā)生變化,其檢測(cè)結(jié)果的可信度將受質(zhì)疑。
 
  3. 溫差較大時(shí),因保留時(shí)間不穩(wěn)將增加檢測(cè)工作的麻煩。
 
  4. 溫度低的時(shí)候,因流動(dòng)相黏度增加而使檢測(cè)時(shí)間延長(zhǎng),同時(shí)增加泵的磨損,影響設(shè)備的使用壽命。
 
  5. 溫度低的時(shí)候還因溶解度相對(duì)下降而出現(xiàn)緩沖鹽結(jié)晶而堵塞泵、進(jìn)樣閥、管道、色譜柱的現(xiàn)象。
 
  6. 溫度低時(shí)還因溶解度下降使雜質(zhì)吸附在填料上而難于洗脫,從而 影響色譜柱的使用壽命。
 
  ☆對(duì)于流動(dòng)相溫度的控制目前沒(méi)有很好的方法,即使是整個(gè)室內(nèi)使用空調(diào)也難于使流動(dòng)相的溫度保持一致,因此,目前大多采用控制柱溫的方法,使用柱溫箱能耗低,控溫精度高,是液相色譜儀必備的輔助設(shè)備,藥品標(biāo)準(zhǔn)中,有不少品種對(duì)柱溫也有明確要求。


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