1、液相色譜儀—氣泡溢出
流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。
2、液相色譜儀—柱壓高原因
(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);
(2)樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
3、液相色譜儀—既無壓力指示,又無液體流過
(1)泵密封墊圈磨損;
(2)大量氣泡進入泵體。處理對于第一種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
4、液相色譜儀—壓力波動大,流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
5、液相色譜儀—出峰不佳,峰分叉
(1)色譜柱被污染;
(2)柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。
6、液相色譜儀—峰面積重復(fù)性不佳
(1)進樣閥漏液;
(2)加樣針不到位。
(3)液量不足.
處理對于第一種情況更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應(yīng)清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
正確的維護和保養(yǎng)高效液相色譜質(zhì)譜儀，能夠提高儀器使用壽命，使儀器穩(wěn)定的工作得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)。
液相色譜儀部分：
一、
流動相的制備要求：
高效液相級色譜醇，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾；
流動相脫氣至關(guān)重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法。
二、
高壓恒流泵的維護和保養(yǎng)
1．高壓恒流泵為整個色譜系統(tǒng)提供穩(wěn)定均衡的流動相流速，保證系統(tǒng)的穩(wěn)定運行和系統(tǒng)的重現(xiàn)性。高壓輸液泵由步進電機和柱塞等組成，高壓力長時間的運行回逐漸磨損泵的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。在升高流速的時候應(yīng)梯度勢升高，每次升高0.2mL/min當壓力穩(wěn)定時再升高，如此反復(fù)直到升高到所需流速。
2．特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換
3．在儀器使用完了以后，要及時清晰管路沖洗泵，保證泵的良好運轉(zhuǎn)環(huán)境，保證泵的正常使用壽命。
YL9900 液相色譜質(zhì)譜儀 LC/MS
三、
色譜柱的維護和保養(yǎng)
1．所使用的流動相均應(yīng)為HPLC級或相當于該級別的，在配置過程中所有非HPLC級的試劑或溶液均經(jīng)0.45um薄膜過濾。而且流動相使用前都經(jīng)過超聲儀超聲脫氣后才使用。
2．所使用的水必須是經(jīng)過蒸餾純化后再經(jīng)過0.45um水膜過濾后使用，所有試液均新用新配。并且在進樣的樣品都必須經(jīng)過0.45um薄膜針筒過濾后進樣。
3．所使用到的最大流速為1.0mL/min，所以流速提升過程應(yīng)是梯度提升，不存在流速的突升突降。
4．儀器檢測完，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色譜柱1小時以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色譜柱40分鐘以上。
四、
工作站的維護
出現(xiàn)死機可重啟計算機；不正常運行時，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機上重新插拔接口、重新安裝軟件。
液相質(zhì)譜儀質(zhì)譜部分：
七、死機處理的9個步驟
1.Analyst軟件中Hardware configure重新deactive，再active。
2.用CTRL-ALT-DEL，Windows任務(wù)管理器結(jié)束任務(wù)，關(guān)掉Analyst軟件,然后重新打開Analyst。
3.關(guān)掉Analyst軟件，Stop Service后重新打開Analyst軟件。
4.重新啟動控制儀器的電腦，HPLC重新啟動，再active。
5.StopService后進入Scu21.exe中，clear GPIB Bus。
6.StopService后進入Scu21.exe中，Reset System controller。
7.同時按下電源旁邊的兩個按扭reset。
8.重新開關(guān)儀器總電源。
9.StopService后進入Scu21.exe中。
※說明：一步不行，再使用下一步，不一定7步都需要做完
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高效液相色譜是目前應(yīng)用較多的色譜分析方法，高效液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn);進樣系統(tǒng)要求進樣便利切換嚴密;由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。
1、選擇流動相時應(yīng)注意的幾個問題：
盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。
避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。
試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。
流動相同時還應(yīng)滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應(yīng)有較強的紫外吸收，一般檢測波長應(yīng)大于流動相的截止波長。
2、泵的維護保養(yǎng)：
防止任何固體微粒進入泵體，否則會磨損柱塞、密封環(huán)缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先對流動相進行過濾，可采用Millipore濾膜(0．22μm或 0．45μm )等過濾。泵的入口都應(yīng)該連接砂濾棒(或片)， 輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常更換。
流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)， 含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)， 尤其是停泵過夜或更長時間。分析工作結(jié)束后必須用純水充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合固定相，可以是甲醇或甲醇和水)
泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相用完，否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、密封環(huán)或缸體，最終產(chǎn)生漏液。
輸液泵的工作壓力不要超過規(guī)定的最高壓力，否則會使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。
3、紫外檢測器維護保養(yǎng)：
流通池進入氣泡會干擾基線，并極難排出，應(yīng)使用充分脫氣的流動相，以減少氣泡的產(chǎn)生。
應(yīng)定期沖洗系統(tǒng)，避免流通池干涸。
檢測器中氘燈( 光源) 隨著使用時間的增加，氘燈強度降低，噪音會不斷增大，故分析前柱平衡得差不多時，再打開檢測器，分析工作結(jié)束及時關(guān)閉檢測器（頻繁開關(guān)檢測器也會縮短檢測器壽命，一般開啟間隔少于4小時，不建議關(guān)閉檢測器）。
塵埃在靜電的作用下容易覆蓋在光學(xué)元件上， 使光傳播效率降低，增加了光散射， 影響分析效果， 因此檢測器周圍的環(huán)境應(yīng)保持清潔。
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