液相色譜中的過濾器
過濾器，一般在液相里面出現(xiàn)的地方有三個。最前面的在溶劑瓶中，接在溶劑管路的頭上，一般是不銹鋼燒結材料的，也有是高分子材料的。可以過濾掉溶劑中的雜質(zhì)。溶劑一般應該是很干凈的，有機相使用色譜純?nèi)軇?，水是去離子水，都是經(jīng)過了0.22微米濾膜過濾的。緩沖溶液應該經(jīng)過濾膜過濾后再使用。夏天，容易長霉菌，應該經(jīng)常注意清洗，換溶劑的時候可以用手摸一下，如果摸上去滑滑的，肯定是臟了，清水里面超聲即可，不行再加點酸。第二個出現(xiàn)過濾器的地方是泵后兩相混合的地方，一般是為了防止兩相溶劑混合后有析出情況，是和混合器合在一起的，也是一個燒結的不銹鋼篩板，也應該定期清洗的。第三個會出現(xiàn)過濾器的地方就是柱前了，通常接的是保護柱，其最主要的作用就是保護后面昂貴的色譜柱。原理一個是會過濾掉流動相中的顆粒物，再就是遇到對色譜柱有傷害的溶劑時，犧牲自己，保護后面的色譜柱，前提是保護柱與后面的色譜柱是同一種顆粒的，其實，個人認為，這種情況幾戶不會發(fā)生，即使發(fā)生了，短短的一段保護柱，能否保護后面的色譜柱也很難說。色譜柱最大的敵人，還是流動相中出現(xiàn)的小顆粒物，正式基于這種思路，現(xiàn)在的UPLC，為了最大限度的減少管路死體積，采取了在線過濾器，以燒結不銹鋼篩板代替保護柱，同樣可以有效的保護后面的色譜柱
一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜系統(tǒng)應從以下幾個方面考慮：
一．主要技術指標優(yōu)異：
首先是如何看指標。液相色譜儀的指標很多，有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認為要看主要技術指標，根據(jù)國家標準，儀器的主要指標有噪音，漂移，最小檢測濃度，定性定量重復性等。這些指標都要放在系統(tǒng)，回路里去看，去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好，如接好色譜柱，進樣閥，并且要通上流動相。因為您在分析中也都是聯(lián)接好以后才可以進行分析的，而不是單單用個檢測器或是泵的。
然后在這個基礎上，我們再去比較這些主要指標。
1．噪音
是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結果。
2．最小檢測濃度（最小檢測限）
是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H（CL ：最小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測濃度 H：樣品峰高）由上式可見，最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎上去比較噪音。
3．漂移
是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
4．定性定量重復性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結果才能使人信服。
有的朋友會認為這些指標好像都是檢測器的。對的，但是就前面所說條件是要放在整個回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如：泵的脈動會直接影響噪音指標，泵的流量準確度、精確度指標，以及密封性不好也會影響相關指標。所以要系統(tǒng)地看指標。例如：某些公司在公布的指標中，噪音和漂移指標寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個指標只考核了UV檢測器光學和電氣的特性，與實際情況相差甚遠，并沒有考驗泵的壓力脈動，液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認為從以上的主要指標中可以反應出儀器的一些真實水平。
二．操作方便：
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學儀器有限公司的WS-100工作站軟件實現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。
三．系統(tǒng)的，整體開發(fā)
這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象，說我的泵是進口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區(qū)。液相色譜是個復雜的系統(tǒng)，不是整體開發(fā)的，各項指標之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會高到哪里去，而且在售后服務方面對用戶也是不負責任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點有：各項技術指標統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實力。
國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的，所以能夠保證儀器的整體水平。
四．穩(wěn)定可靠，故障率低
從以上各方面比較，LC-100智能液相色譜系統(tǒng)完全符合一臺優(yōu)秀儀器的所有特點，代表了目前國產(chǎn)液相色譜的真正水平。
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液相色譜具有分離效率高、分析速度快和應用范圍廣等特點,特別適合于高沸 點、大分子、強極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析。目前液相色譜已成為化學、生化、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等學科領域中重要的分離技 術,是分析化學家和生物化學家手中用于解決他們面臨的各種實際分析和分離課題必不可少的工具之一。雖然在檢測分析中使用了昂貴的、性能優(yōu)越的精密儀 器,但是由于在樣品的前處理,標準溶液的制備,樣品液的測定,分析中的污染,儀器常見故障等等問題上的不注意,而引起大的系統(tǒng)誤差,使整個測定分析失敗。 現(xiàn)就液相色譜分析的應用中樣品預處理注意的幾個環(huán)節(jié),作簡要分析,以達到更好的檢測效果。 下一篇：冷熱沖擊試驗箱技術參數(shù)
1 樣品預處理方法
樣品預處理應 包括進樣前的一切操作。除了稱重、溶解、稀釋等步驟外,樣品需要: ①過濾; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色譜(低壓柱層析) 。這些操作可以是手工進行或?qū)嵭凶詣踊僮?。樣品預處理的目的是除去干擾物、增加檢測器靈敏度(富集) 、保護色譜柱等。樣品預處理同時也是為了避免色譜分離故障,其中樣品萃取是關鍵的一步,要從大量的干擾物中萃取出微量組分難度極大。
有些樣品經(jīng)預 處理后還不能作進樣分析,需進行衍生化處理,使一些無紫外吸收或無熒光的組分,經(jīng)過衍生化后能用紫外和熒光檢測器檢測,這樣既提高了靈敏度,又改善了分離 度(質(zhì)量變化) 。樣品預處理的同時也會帶來一些問題,如樣品損失、樣品被污染、衍生化反映不完全或多種反應物生成等。衍生反應常會影響試驗的度,或者在整個樣品預處 理過程中帶來誤差。
用于液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無顆粒,有顆粒會損壞進樣器并阻塞柱頭。處理好的樣品在準備上柱前應對準光線搖 動,檢查樣品溶液中有無顆粒。只要看到顆粒、混濁或乳化,就應過濾一下,過濾膜要能截留住015μm 以上的顆粒,樣品過濾的過程中可能引起:樣品被污染,因過濾吸附降低樣品組分的含量,樣品溶劑揮發(fā)引起誤差。萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析 的組分,或者減少損壞柱的物質(zhì)(如蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機溶劑萃取,要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對待測樣品有良好的溶解度且又 與水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進樣,有時需要濃縮或吹干濃縮,再用定體積的液體或 流動相溶解進樣。這樣增加了樣品濃度,提高了靈敏度,同時避免了溶劑峰對樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外,還 有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽。萃取方法如下:
1.1 水溶性樣品
(1) 酸性組分及生成的鹽萃取方法:有機溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N2 流下吹干,用適當?shù)娜軇┙夂筮M樣。
(2) 堿性組分及生成的鹽萃取方法:有機溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性,再加有機溶劑萃取或進樣,或在N2 流下吹干,用適當?shù)娜軇┤芙夂筮M樣。
(3) 中性組分萃取方法:有機溶劑萃取雜質(zhì)后,直接用反相色譜法分析。
1.2 脂溶性組分萃取方法:有機溶劑萃取或進樣,或在N2 流下吹干,用適當?shù)娜軇┤芙夂筮M樣。
2 分析中的污染
一般檢測的環(huán)境、容器、試劑都是影響測定結果的因素。
2.1 環(huán)境污染
儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染,影響檢測結果,這種污染很難校正。因此,儀器室與其他實驗室應隔離,保持清潔,儀器室內(nèi)應安裝空調(diào),注意防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應小于70 %為宜。
2.2 容器
實驗室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等,在進行分析時,應按照待則樣品的要求來選則器皿,不管使用哪種器皿,容器的洗條清潔都是很重要的,也是取得好的檢測結果的基本保證。
2.3 試劑
在液相色譜分析中,所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級純或分析純,如果用含量有雜質(zhì)的試劑,則會出現(xiàn)雜峰而影響測定結果。
3 標準溶液的配置
在配置標準溶液時,先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標溶液,在標準溶液和樣品溶液中好使用同一批次配制的內(nèi)標溶液以減少誤差。
(1) 配制標準溶液的物質(zhì)應當是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。
(2) 常用的標準溶液應存放在棕色溶液瓶中低溫保存。
(3) 在配制維生素類標準品時,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。
4 樣品預處理過程中的主要故障與解決辦法
(1) 色譜圖中出現(xiàn)無關的峰,原因有可能是樣品過濾器帶來污染,解決方法如下:
?、賹⑦^濾器浸泡在樣品溶劑中并進樣試驗; ②改變過濾器類型; ③采用交替清洗技術。
(2) 一些或全部化合物的峰比預期的小,尤其是低濃度的樣品,原因可能是樣品過濾器表面吸附下降,解決方法如下:①改變過濾器類型; ②嚴格按相同條件處理所用樣品; ③采用交替清洗技術。
(3) 回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解決方法如下:①增加萃取時間,使用熱溶劑; ②修改清洗方法。
(4) 色譜峰變寬,柱壽命縮短,原因可能是樣品帶來的干擾與污染,應改進清洗方法。
(5) 精度差,原因可能是回收不完全,解決方法如下:①改進或替換衍生化、分離、萃取或其他條件; ②用自動化處理裝置提高精度。
總之,對分析儀器來說,避免故障的主要的做法是正確的操作和調(diào)節(jié),切忌盲目操作,對核心部位如離子室、微電流放大器等減少震動和碰撞,保證絕緣,并減少
各種系統(tǒng)誤差要注意以上要點,但還要注意日常的儀器保養(yǎng),色譜柱子的維護,儀器室保持清潔,這樣才能使液相色譜處于佳工作狀態(tài),在分析中發(fā)揮其重要的作用。
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