色譜柱的使用和維護(hù)
色譜柱的使用和維護(hù) 卡套柱是默克公司推出的新型環(huán)保色譜柱技術(shù)，它具有以下的特點(diǎn)：
· 換柱方便：不需要任何工具，僅用雙手手指即可以輕松換柱
· 防止?jié)B漏：避免了柱頭頻繁拆卸而造成的滲漏
· 經(jīng)濟(jì)實(shí)惠：每次只需要購買柱芯，可以節(jié)約40~60%的費(fèi)用
· 適用性強(qiáng)：可以和任何品牌的液相色譜儀器連接使用
每天用足夠的時(shí)間來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，
而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！-------------一定得做！
新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上的測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。
卡套柱的安裝(不加預(yù)柱)
1. 將卡套架1套入柱芯2
2. 將兩片夾套片3嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套
3. 將已套到柱芯上的卡套架1向上推，直至高過夾套片
4. 將卡套帽4和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊
5. 然后依同樣的順序連接好柱子的另一端
6. 連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手
注意；使用卡套柱時(shí)，兩端的卡套應(yīng)時(shí)刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時(shí)候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。
卡套柱的安裝(加預(yù)柱)
1. 將卡套架1套入柱芯2
2. 將兩片夾套片3嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于 柱芯2
3. 將已套到柱芯上的卡套架1向上推，直至高過夾套片
4. 將"子彈頭"預(yù)柱放入卡套片內(nèi)
5. 將卡套帽4和卡套架1旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊
6. 然后依同樣的順序連接好柱子的另一端
7. 連接到液相色譜儀，PEEK接頭手?jǐn)Q即可；若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手
平衡色譜柱
反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲存或運(yùn)輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應(yīng)使用10~20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"。
· 硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請?jiān)谑褂昧鲃酉嘀坝靡掖蓟虍惐计胶?
如何平衡色譜柱？
· 在拿到一根新的色譜柱時(shí)，應(yīng)首先用0.2ml/min的流速將色譜柱平衡過夜，然后將流速升高到1.0ml/min沖洗30分鐘，以便將色譜柱的填料充分平衡至較佳狀態(tài)，這樣可以保證色譜柱的使用壽命，并且保證在以后的使用中，獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。
· 平衡過程中，將流速緩慢地提高
· 用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時(shí)間來平衡)
色譜柱的再生
色譜柱在使用一段時(shí)間后柱效會下降，這時(shí)可以考慮對色譜柱進(jìn)行再生。
進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵，我們建議：可以不使用您的高效液相色譜儀上的泵。
表1 建議用來沖洗的溶劑體積
色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積
125-41.6ml30ml
250-43.2ml60ml
250-1020ml400ml
請根據(jù)下表選擇您的再生方法：
極性固定相(如Si, NH2*, DIOL基色譜填料)的再生：
正庚烷 e 氯仿 e乙酸乙酯 e 丙酮 e乙醇e 水**
非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8, CN等)的再生：
水 e乙腈 e 氯仿(或異丙醇) e 乙腈 e 水
0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱
注意：
*在對NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
**如果簡單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M的硫酸沖洗非常有效。
色譜柱的維護(hù)：
1. 使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）
2. 大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2~7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍
3. 避免流動相組成及極性的劇烈變化
4. 流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理
5. 如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈，并保存在乙腈中
6. 壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號
新色譜柱開啟和安裝的推薦步驟：
1. 開啟色譜柱的包裝盒，查看色譜的測試報(bào)告；
2. 根據(jù)色譜柱身上箭頭標(biāo)明的流向先將色譜柱入口端連入系統(tǒng)，柱出口端先不要連接；
3. 0.1 mL/min 流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2 min內(nèi)將流速升至0.5 mL/min;
4. 當(dāng)溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上；
5. 重啟流速，然后在0.1 mL/min 流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱30 min，在10 min內(nèi)將流速升至1.0 mL/min沖洗30 min。
6. 參考柱效測試報(bào)告中的方法，30 min內(nèi)將流動相梯度轉(zhuǎn)換到柱效測試的流動相條件，然后使用5-10倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至壓力與基線穩(wěn)定。
7. 測試柱效。如果柱效與出廠報(bào)告偏移過大，或峰形拖尾就需要進(jìn)行故障排查或聯(lián)系上海易創(chuàng)分析儀器有限公司。
反相色譜柱的清洗與再生：
1. 發(fā)現(xiàn)柱壓升高，色譜峰出現(xiàn)嚴(yán)重拖尾、肩峰甚至峰分岔，或分離度降低，有可能是樣品溶解度、色譜柱溫度、堿性化合物干擾，也很有可能是色譜柱受污染，可以采取以下措施：
2. 如系統(tǒng)有連接在線過濾器或保護(hù)柱，首先排查在線過濾器與保護(hù)柱，可能需要更新。
3. 使用純有機(jī)相低流速沖洗過夜。（如有使用緩沖鹽，應(yīng)使用不含緩沖液的流動相沖洗1h，然后再梯度過渡到純有機(jī)相低流速沖洗過夜。）
4. 如有機(jī)相清洗不能解決問題，可采用如下方法進(jìn)行色譜柱的清洗和再生。根據(jù)樣品的性質(zhì)以及你了解的污染物性質(zhì)選擇清洗方法，用20-30倍柱體積（4.6*250 mm分析色譜柱大約80-120 mL溶劑清洗，流動相溫度升至30-50 oC，然后再重復(fù)步驟3的方法。
5. 氨基柱
反相色譜柱的保存：
1. 反相色譜柱應(yīng)保存于純有機(jī)相中（如乙腈或甲醇）。色譜柱使用于高溫或極端pH條件下，或停用超過48小時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行簡單的清洗過程；
2. 清洗首先用不含緩沖鹽的流動相沖洗20-30倍柱體積, 然后30 min內(nèi)梯度過渡到純有機(jī)相，再用純有機(jī)相沖洗20-30倍柱體積；
3. 后使用原配的柱堵頭擰緊，確保堵頭溶劑不會揮發(fā)。若是氨基柱則應(yīng)該在步驟2中添加0.1%的氨水，有利于延長氨基柱的壽命；
色譜柱基本上是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必備的一種實(shí)驗(yàn)室耗材，色譜柱的品牌規(guī)格很多，每一種色譜柱都應(yīng)對于相對于的樣品分析中。
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