液相色譜的柱前衍生和柱后衍生
1、為什么要衍生?
衍生化較為主要的目的就是提高目的物的可檢測性。對于GC來講，多數(shù)是為了增強(qiáng)目的物揮發(fā)性或者改善目的物極性;對于HPLC來講多數(shù)是為了提高檢測器對目的物的相應(yīng)。
2、衍生化分類：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在經(jīng)過分析柱前使分析物與衍生劑反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物在分析柱上實(shí)現(xiàn)分離，實(shí)際分離的是衍生產(chǎn)物，檢測的也是衍生產(chǎn)物;柱后衍生是分離物在分析柱中實(shí)現(xiàn)分離后，在衍生池內(nèi)與衍生劑反應(yīng)，在柱子中分離的是目的物，在檢測器處檢測的衍生產(chǎn)物。
3、適用的化合物：生物酸/堿、胺類、抗生素(聚醚類抗生素多見)和氨基酸類。
4、衍生化要求?
1)衍生劑必須過量且穩(wěn)定;不過量反應(yīng)不完全，檢測不充分。不穩(wěn)定，重現(xiàn)性差。
2)衍生物、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物至少是好分離的。當(dāng)然如果只能檢測到衍生產(chǎn)物可以。
3)衍生反快速完全。反應(yīng)慢，柱前衍生還可以，但柱后不行。因?yàn)榱魉俟潭?，衍生池管路長度一定，留給衍生化的時間是一定的。柱前衍生可以在系統(tǒng)外等衍生完畢后進(jìn)樣，但也是影響效率的。
5、兩種衍生比較
柱前衍生優(yōu)點(diǎn)是，對設(shè)備要求不高，可以手工衍生，而且對衍生時間要求相對寬泛。缺點(diǎn)是，引入了過多的物質(zhì)，如：衍生劑、衍生產(chǎn)物(當(dāng)然這個是檢測需要的)和衍生副產(chǎn)物，對柱子有潛在的負(fù)面影響，另如采用手工衍生也會引入過多的認(rèn)為因素。
柱后衍生優(yōu)點(diǎn)是，重現(xiàn)性好，人為因素少，引入物質(zhì)比較少。缺點(diǎn)是，可能有擴(kuò)散問題，在柱子中分離結(jié)束后，就存在擴(kuò)散，如果衍生慢(必然流速低)、管路長擴(kuò)散問題就會比較嚴(yán)重，再有就是要求有一套外源的泵系統(tǒng)和一個檢測池，對于設(shè)備要求較高。
高效液相色譜儀分析中，選擇流動相時應(yīng)考慮流動相與填料的作用、純度、與檢測器的匹配、粘度、對樣品的溶解度和樣品回收等方面。
1、流動相與填料的作用：
流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。
低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機(jī)相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。
堿性流動相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。
酸性流動相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度：
色譜柱的壽命與大量流動相通過有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時。
3、與檢測器的匹配：
當(dāng)使用UVD時，所用流動相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。
當(dāng)使用RID時，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度。
4、粘度：
高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴(kuò)散和傳質(zhì)，使柱效降低，還會使柱壓增加，分離時間延長。盡量選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動相。
5、對樣品的溶解度：如果溶解度欠佳，樣品會在色譜柱內(nèi)沉淀，不但影響純化分離，而且會使色譜柱惡化。
6、樣品回收：應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
高效液相色譜儀分析選擇流動相時應(yīng)注意的問題：
1.盡量使用高純度溶劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)，產(chǎn)生偽峰。
2.避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降和損壞色譜柱，如使固定液溶解流失和酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。
3.樣品在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。
4.流動相粘度低（粘度適中）。若使用高粘度溶劑，會增高壓力，不利于分離。常用低粘度溶劑有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度過低的溶劑也不宜采用，如戊烷等，它們?nèi)菀自谏V柱和檢測器內(nèi)形成氣泡，影響分離。
5.化學(xué)穩(wěn)定性好。
6.流動相應(yīng)滿足檢測器的要求。
對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長長。所謂溶劑的紫外截止波長是指當(dāng)小于截止波長的輻射通過溶劑時，溶劑對此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收，此時溶劑被看作是光學(xué)不透明的，會嚴(yán)重干擾組分的吸收測量。
對于示差折光檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，以達(dá)到zui高靈敏度。
液相色譜儀，看你分離的樣品的種類，看流動相是否和樣品互溶，分離程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多種，看樣品的沸點(diǎn)，溶解性。
標(biāo)簽: 高效液相色譜儀 高效液相色譜儀標(biāo)簽： 關(guān)于高效液相色譜儀流動相的選擇如何呢？_高效液相色譜儀組合標(biāo)題： 液相色譜儀的密封圈更換是所有液相色譜分析人員都必須學(xué)會的方法。各類型的檢測儀器有不同的操作方法，可以參照各自的使用手冊，簡要介紹如下。
、準(zhǔn)備好工具和所需部件。工具包括扳手、超聲清洗器、密封圈安靜工具、新密封圈。用水-甲醇沖洗泵，拆開進(jìn)出口管道，在泵頭和單向閥上標(biāo)出液流方向。
第二、將柱塞桿縮至小，松開泵頭的收緊螺釘，小心托住泵頭。操作時要注意處處以平衡的動作慢慢退出泵頭，切不可搖動或上下左右擺動泵頭。
第三、從密封圈孔中輕輕拔出舊密封圈，注意不要化泵頭內(nèi)壁，要毫不猶豫地隨即扔掉舊密封圈。
第四、將泵頭和新密封圈分別放入甲醇中超聲清洗，同時用無纖維紙擦洗柱塞桿。察看柱塞桿上有無劃痕，如有劃痕應(yīng)換新柱塞桿然后再安裝密封圈，
第五、安裝新密封圈。這一步要用專門的安裝工具，切不可粗心大意，避免損壞密封圈。
第六、重新裝上泵頭。先在柱塞桿上滴幾滴甲醇以濕潤，滑動泵頭到位。千萬不能搖動或擺動，以防柱塞桿在這一步操作時折斷。平衡地上緊固定螺絲，接上進(jìn)液管道。
后、打脫氣甲醇到泵腔中，不斷用紙巾從泵出口處吸去流出的液體，等到無氣泡一處再接上輸出管道，打開放空閥，繼續(xù)抽20mL甲醇趕走氣泡后，換成需要使用的流動相。
449717568
