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高效液相色譜法測定清肝利膽口服液中厚樸酚 液相色譜如何操作

時(shí)間：2020-08-31    來源：儀多多儀器網(wǎng)    作者：儀多多商城     
高效液相色譜法測定清肝利膽口服液中厚樸酚與和厚樸酚含量

摘要：目的：建立測定清肝利膽口服液中厚樸酚、和厚樸酚含量的高效液相色譜法。方法：色譜柱為Agela Promosil C18（250mm*4.6mm，5µm）；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（50:20:30），檢測波長為294nm；柱溫為35°C；流速為1.0mL·min-1.結(jié)果：厚樸份的線性范圍為0.2558-1.536µg，R²=0.9999，平均回收率99.13%，RSD為0.28%；和厚樸酚的線性范圍為0.2500-1.500µg，R²=0.9998，平均回收率為99.27%，RSD為0.45%。結(jié)論：該法簡便快速，重現(xiàn)性好，可作為清肝利膽口服液質(zhì)量控制的定量方法。

關(guān)鍵詞：清肝利膽口服液；厚樸酚；和厚樸酚；高效液相色譜法；含量測定

doi：10.3969/j.issn.   1004-4337.2010.06.032

　　【中國儀器網(wǎng) 使用手冊(cè)】液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。如今，該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。尤其是在藥物分析領(lǐng)域，有著廣泛的應(yīng)用。
 　　液相色譜在藥物分析中的應(yīng)用，主要考慮試樣的預(yù)處理和分析柱、檢測器的選擇。在試樣的預(yù)處理上，日前興起的固相(微)萃取使得許多含量低的成分得到精制提純，從而適于液相色譜的測定。中藥中有些紫外吸收，或無特征紫外吸收的成分，直接用液相色譜測定，其靈敏度和分離度都不盡人意，利用柱前或柱后衍生化法可使這些成分較地測定出來。對(duì)于極性大、脂溶性差物質(zhì)，在YWGCl8柱上不易保留，用十二烷基磺酸鈉作為離子對(duì)試劑，降低其極性，延長柱上的保留時(shí)間，取得較好的分離較果。
 　　將液相色譜和質(zhì)譜這兩個(gè)強(qiáng)有力的分析技術(shù)在線連接在一起，經(jīng)過三十年的發(fā)展已成為一項(xiàng)較為成熟的分析手段，但是它從形成伊始就存在著問題：從液相色譜流進(jìn)質(zhì)譜時(shí)，流動(dòng)相的變化、溶劑的組成、高溫高壓離子化的問題制約著這種聯(lián)用技術(shù)發(fā)展。大氣壓離子化接口具有去除溶劑和離子化的雙重功效，它的引入使得該技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。電噴霧離子源是一種軟電離技術(shù)，一般只生成(M H) 和(M-H)-兩種分子離子峰，選擇性監(jiān)測(mz)190的負(fù)分子離子峰，具有較高的靈敏度、準(zhǔn)確度、專一性，滿足了低濃度藥物研究的需求。
 　　三維液相色譜法可以同步測定葛根素和阿魏酸兩種指標(biāo)。通過實(shí)驗(yàn)證明：如果選擇合適的柱溫等色譜條件，乙醇作為反相液相色譜流動(dòng)相，分析中藥及中成藥中有效成分，既安全又準(zhǔn)確。結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)，普通的檢測器難以檢測出來，液相色譜-電化學(xué)法可以有效地測定黃連粉中僅差一個(gè)基團(tuán)的黃芩苷和黃芩素的含量。樣品經(jīng)色譜柱分離后收集，再經(jīng)熒光分光光度計(jì)測熒光強(qiáng)度，影響因素多，測定復(fù)雜。改進(jìn)后的液相色譜-熒光法則可以不經(jīng)衍生化和收集分離物，只經(jīng)化學(xué)處理除雜，濃縮后直接進(jìn)樣即可。用該法測定貫葉連翹中金絲桃素的含量也取得了較好的結(jié)果。液相色譜-示差折光測黃芪精口服液中黃芪甲苷的含量也都取得了較為滿意的結(jié)果。對(duì)于只有紫外末端吸收，用紫外檢測時(shí)靈敏度低，基線易漂移，示差折光檢測其易受外界條件干擾，蒸發(fā)散射檢測器能克服以上不足，響應(yīng)值只與樣品質(zhì)量有關(guān)，其信號(hào)相應(yīng)與質(zhì)量成正比，不同化合物，質(zhì)量相同則信號(hào)相應(yīng)基本一致。蒸發(fā)光散射檢測法是基于不揮發(fā)樣品分子對(duì)光的散射程度與其質(zhì)量成正比，與其所含基團(tuán)性質(zhì)無關(guān)。只要選擇適當(dāng)?shù)臋z測器參數(shù)，便可使流動(dòng)相和溶劑完全氣化，不產(chǎn)生信號(hào)，而樣品中的各個(gè)組分以不揮發(fā)粒子存在，對(duì)光有散射，以被檢測出來。因此，蒸發(fā)光散射檢測器可用于含不同基團(tuán)的多組分同時(shí)分離、分析。和紫外、熒光等方法相比，蒸發(fā)光散射檢測法對(duì)不同物質(zhì)有近似相同的響應(yīng)因子。
 　　在談到藥用輔料檢測中的其他液相色譜檢測方法時(shí)，液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)作為微量元素測定的有效途徑之一，液相色譜高分離度與電感耦合等離子體質(zhì)譜低檢測性、寬動(dòng)態(tài)線性范圍及能同時(shí)測定多種元素、跟蹤元素的變化等特點(diǎn)融合，目前已廣泛的用于食品、環(huán)境、體內(nèi)外藥物分析中微量元素的測定。該方法應(yīng)用于藥用輔料中微量元素砷、汞、鉻等檢測的探索性研究項(xiàng)目已在試驗(yàn)室開展。目前雖罕見相關(guān)報(bào)道，隨著技術(shù)的成熟與儀器的發(fā)展，其在藥用輔料檢測中有著廣泛的應(yīng)用前景。同時(shí)，液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)因儀器昂貴，核磁共振靈敏度相對(duì)較低，液相色譜需使用氘代溶劑，溶劑信號(hào)易對(duì)樣品產(chǎn)生干擾等，使其在藥物分析中廣泛應(yīng)用存在一定障礙，但核磁共振在結(jié)構(gòu)分析方面有獨(dú)特的優(yōu)勢，能夠提供豐富的結(jié)構(gòu)信息，彌補(bǔ)液相色譜通用檢測器只能得到非常有限的結(jié)構(gòu)信息的不足，在實(shí)際藥用輔料雜質(zhì)分析中已進(jìn)入使用階段。
 　　綜合上述研究成果可以知曉，目前液相色譜法在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用是多方面的。而且為了滿足特定的檢測需求，液相色譜與多種其他方法、其他儀器聯(lián)合，不斷改進(jìn)自身缺陷，為藥物分析提供更佳的解決方案。相信這項(xiàng)技術(shù)在未來還會(huì)有更廣闊的應(yīng)用空間。

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