液相色譜儀作為分析實(shí)驗(yàn)室高端必備儀器之一，是實(shí)驗(yàn)室分析員應(yīng)用頻率較高的儀器，縱然是經(jīng)常使用的經(jīng)驗(yàn)豐富的老司機(jī)在使用過程里不可避免的還是往往疏忽一些問題，從而導(dǎo)致一些儀器的故障。方便快速的分析過程固然重要，但是為了多種樣品而忽略了一些細(xì)節(jié)步驟，總是會(huì)犯些錯(cuò)。在使用液相色譜儀時(shí)四大關(guān)鍵因素，對(duì)正確使用極為重要，下面給大家說說：
1、液相色譜儀本身：
對(duì)于儀器本身一般不會(huì)有問題，特別是剛買回來的新儀器。對(duì)于儀器本身比較重要的就是儀器的校驗(yàn)，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對(duì)儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過后，再請(qǐng)國(guó)家或省級(jí)儀器檢定局的來校驗(yàn)，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會(huì)對(duì)儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗(yàn)，目的就是為了保證儀器的正?？蛇\(yùn)行狀態(tài)。
2、色譜條件：
色譜條件一般包括流動(dòng)相、色譜柱、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速及進(jìn)樣量。
流動(dòng)相就涉及到配制流動(dòng)相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18、2兆歐級(jí)別，試劑試液要求用色譜級(jí)別的，原因?yàn)榉乐顾驮噭┰囈褐械碾s質(zhì)對(duì)色譜結(jié)果的干擾。
色譜柱會(huì)因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個(gè)在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會(huì)造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測(cè)波長(zhǎng)也會(huì)因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測(cè)器氘燈能量的變化，比如基線波動(dòng)大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時(shí)，但實(shí)際上使用時(shí)間不止，可根據(jù)實(shí)際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1、0ml/min，流速是不可隨意改動(dòng)的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時(shí)為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證，會(huì)對(duì)流速進(jìn)行改變以評(píng)價(jià)方法的適用性。對(duì)于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，如果使用六通閥自動(dòng)進(jìn)樣，一般進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。
3、操作人員：
首先，作為液相色譜儀操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)液相的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握最基礎(chǔ)故障的排除和維修。
一般液相色譜儀的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會(huì)出現(xiàn)問題，當(dāng)然這里需要特別指出的是對(duì)于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動(dòng)相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅(jiān)持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過強(qiáng)、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時(shí)間。
其次，操作人員在配制液相色譜儀分析用待測(cè)樣品溶液時(shí)，由同一個(gè)人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差從而造成分析的失敗或誤差。
4、液相安裝環(huán)境：
液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)的臺(tái)面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個(gè)是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個(gè)是為減少對(duì)人體的危害。
液相色譜儀的應(yīng)用，可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用高效液相色譜儀分析。
色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
反沖色譜柱，一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。
有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。
工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。
色譜填料：經(jīng)過制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。
色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長(zhǎng)250mm。
色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺(tái)面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺(tái)面墩10-20次。
濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜及液-固色譜。現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。
1、 泵。
泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。
1)選擇優(yōu)質(zhì)的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用 0.45um 膜過濾，并進(jìn)行脫氣處理。
2)泵開始使用時(shí)，一定要用合適的流動(dòng)相徹底清洗干凈。
3)定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。
4)改變流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞。
2、色譜柱。
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，基線平穩(wěn)。
1)色譜柱比較嬌氣不能夠碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震蕩;安裝時(shí)要保證閥件或管路的清潔。
2)流動(dòng)相在使用前必須進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動(dòng)相。
3)在滿足靈敏度的前提下，盡可能的使用小進(jìn)樣量。如果樣品比較臟，要進(jìn)行凈化或提純處理。
4)分析結(jié)束后要清洗掉進(jìn)樣閥中殘留的樣品，并用流動(dòng)相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱。
5)如長(zhǎng)期不用，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或定期補(bǔ)充合適的流動(dòng)相。
3 、檢測(cè)器
分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。
4 、進(jìn)樣器
分析結(jié)束后反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。
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