為了獲得準(zhǔn)確的研究結(jié)果,準(zhǔn)確測得樣品溶液的吸光度非常關(guān)鍵。一般來說,分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度,可通過足夠數(shù)量測量的統(tǒng)計(jì)處理來減少;系統(tǒng)誤差影響測量結(jié)果的準(zhǔn)確度,可在大體相同實(shí)驗(yàn)條件下,用比較一種物質(zhì)的準(zhǔn)確測量結(jié)果,使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來。
一、儀器的校正和檢定
1、波長:
儀器波長的允許誤差為:紫外光區(qū)±lnm,500nm附近±2nm。
由于環(huán)境境因素對機(jī)械部分的影響,儀器的波長經(jīng)常會略有變動(dòng),因此除應(yīng)定期對所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外,還應(yīng)于測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83nm,253.65nm,275.28nm,296.73nm,313.16nm,334.15nm,365.02nm,404.66nm,435.83nm,546.07nm與576.96nm;或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正;鈥玻璃在波長279.4nm,287.5nm,333.7nm,360.9nm,418.5nm,460.0nm,484.5nm,536.2nm與637.5nm處有尖銳吸收峰,也可作波長校正用,但因來源不同或隨著時(shí)間的推移會有微小的變化,使用時(shí)應(yīng)注意;近年來,常使用高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器,以10%高氯酸溶液為溶劑,配制含氧化鈥(Ho203)4%的溶液,該溶液的吸收峰波長為241.13nm,278.l0nm,287.18nm,333.44nm,345.47nm,361,31nm,416.28nm,451.30nm,485.29nm,536.64nm和640.52nm。
2、吸光度的準(zhǔn)確度:
可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg,精密稱定,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml,在規(guī)定的波長處測定并計(jì)算其吸收系數(shù),并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較:
波長/nm | 235(最小) | 257(最大) | 313(最小) | 350(最大) |
吸收系數(shù)的規(guī)定值 | 124.5 | 144 | 48.6 | 106.6 |
吸收系數(shù)的許可范圍 | 123.0~126.0 | 142.8~146.2 | 47.0~50.3 | 105.5~108.5 |
其關(guān)系可以用朗伯-比爾定律表述如下:
式中:
A為吸光度;
T為透光率;
E為吸收系數(shù),常用的表示方法,其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%(g/ml),液層厚度為25px時(shí)的吸光度數(shù)值;
c為100ml溶液中所含物質(zhì)的重量(按干燥品或無水物計(jì)算),g。
二、日常維護(hù)
1、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕,使金屬鏡面的光潔度下降,引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕,產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等,甚至儀器停止工作,從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室,配置恒溫設(shè)備,特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
2、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性,也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔,保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件,防塵。
3、儀器使用一定周期后,內(nèi)部會積累一定量的塵埃,可以由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進(jìn)行除塵工作,同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固,對光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔,必要時(shí)對光路進(jìn)行校準(zhǔn),對機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤滑,最后,恢復(fù)原狀,再進(jìn)行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。