酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過(guò)相干濾光片來(lái)獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來(lái)得到。
在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后面,其效果是相同的。
在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng):
1.使用加液器加液,加液頭不能混用。
2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機(jī)洗板,避免交叉污染。
3.嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作,反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。
4.在測(cè)量過(guò)程中,請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板,以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。
5.請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請(qǐng)洗手。
6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說(shuō)明,以防對(duì)操作人員造成損害。
7.如果儀器接觸過(guò)污染性或傳染性物品,請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。
8.不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源。
9.對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù),以達(dá)到好的效果。
10.使用后蓋好防塵罩。
11.出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。
酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。
許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過(guò)目測(cè)判斷結(jié)果,操作過(guò)程隨意性較大,在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣,會(huì)造成較大誤差。
酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專(zhuān)業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用,使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來(lái)越廣泛,同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國(guó)內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開(kāi)展了酶免檢測(cè)項(xiàng)目,如:乙肝五項(xiàng)、艾滋病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測(cè)、激素檢測(cè)等。過(guò)去多數(shù)采用目測(cè)方法,報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如:某弓形蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對(duì)照品的OD值×2.5,通過(guò)目測(cè)無(wú)法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過(guò)臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過(guò)另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國(guó)內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu),如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀,并提供酶標(biāo)儀測(cè)定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說(shuō)明書(shū)沒(méi)有是讓用目測(cè)的。同時(shí)酶免檢測(cè)的項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn),由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測(cè)是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
酶標(biāo)儀在臨床實(shí)驗(yàn)方面應(yīng)用廣泛,用于鑒別乙肝兩對(duì)半,HIV,鑒定DNA等許多方面,可以說(shuō)它是臨床及醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)不可或缺的基礎(chǔ)設(shè)備。
故障一:測(cè)量的結(jié)果重現(xiàn)性不好,即使用空板測(cè)量誤差也在允許的范圍之外。
故障分析:檢查試劑發(fā)現(xiàn)沒(méi)有問(wèn)題,檢查判定公式也沒(méi)有問(wèn)題,檢查光路也沒(méi)有污染。幾經(jīng)周折終于發(fā)現(xiàn)卡微板的卡簧在伸縮后沒(méi)有卡到位,造成微板在測(cè)量時(shí)在機(jī)內(nèi)晃動(dòng)影響測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)。
故障二:測(cè)量結(jié)果OD值偏低。
故障分析:排除完燈的能量值偏低后,檢查發(fā)現(xiàn)濾光片上有灰塵,用蒸餾水和擦鏡紙擦洗干凈晾干后故障排除。
測(cè)試方法:酶標(biāo)儀的儀器指標(biāo)在蕞佳狀態(tài),就儀器的精度測(cè)試和儀器的線(xiàn)性度介紹幾種測(cè)試方法。
精度測(cè)試:該過(guò)程可被用于檢測(cè)不同微板之間的測(cè)量精度。
使用新制備的在0.1% TWEEN20中的橘黃色甲基填充微孔,在每個(gè)微孔中使用不同稀釋度的溶劑以便獲得一個(gè)光密度范圍,首先確保每孔注入200mL液體,使用492nm慮光片測(cè)量至少3次,對(duì)每一微孔進(jìn)行下列計(jì)算:
(1)平均OD值;(2)蕞高和蕞低值;(3)平均值。蕞高和蕞低值之間的差值和百分比。讀數(shù)范圍在0.000到2.000Abs。同一孔平均值,蕞高值和蕞低值之間的差值應(yīng)該在+/一1.0%和+/一0.010OD范圍內(nèi)。
讀數(shù)范圍在2.000到3.000Abs同一孔平均值,蕞高和蕞低值之間的差值應(yīng)在+/一1.0% 和+/一0.005OD值范圍內(nèi)。讀數(shù)范圍在3.000Abs以上時(shí)準(zhǔn)確度不符合要求。
酶標(biāo)儀儀器線(xiàn)性度:儀器的線(xiàn)性度可使用一種溶劑的稀釋系列得到。如可在492 nIn處測(cè)量在0.1%TWEEN20中的橘黃色甲基的稀釋系列。
具體方法如下:在參考光密度計(jì)上測(cè)量被稀釋的溶劑,畫(huà)出OD值對(duì)已知濃度的點(diǎn)圖,并畫(huà)出通過(guò)這些點(diǎn)的蕞好的直線(xiàn)。將從系列稀釋中測(cè)得的吸光度值與該圖比較從而計(jì)算出各稀釋度的濃度。微板中每種稀釋度加入250t,-L,對(duì)每種稀釋至少使用兩個(gè)樣本,以便降低因加樣引起的誤差。 測(cè)量微板使用精確測(cè)量模式,利用測(cè)量得到的平均OD值和每個(gè)樣本的已知濃度畫(huà)一條OD濃度的曲線(xiàn),從系列稀釋中測(cè)得的吸光值與該曲線(xiàn)比較從而計(jì)算出各稀釋度的濃度。
對(duì)光度記和本儀器,比較計(jì)算的濃度,不準(zhǔn)確度不應(yīng)大于以下,使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片492nm時(shí)吸光度在0.000~2.000Abs+/一1%、2.000~3.000Abs+/一1.5%。使用梯度濾光片492nm時(shí),吸光度在0.000~2.500Abs+/一2%。