可見(jiàn)分光光度計(jì)(又名可見(jiàn)光度計(jì)、分光光度計(jì))是可見(jiàn)光分光光度法是利用新的單片機(jī)技術(shù),開(kāi)發(fā)出能夠進(jìn)行定量測(cè)量(標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)量,可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行濃度直讀);OD值直接測(cè)量(吸光度、透過(guò)率和能量等直讀);動(dòng)力學(xué)測(cè)試(測(cè)出物質(zhì)濃度隨時(shí)間變化OD值的變化);光譜掃描(可以對(duì)某一種物質(zhì)進(jìn)行全波段掃描,分析物質(zhì)的特征波長(zhǎng),判斷實(shí)驗(yàn)過(guò)程的誤差);多波長(zhǎng)測(cè)試(可以對(duì)物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行多個(gè)波長(zhǎng)的測(cè)試,分析物質(zhì)的相關(guān)特性);還有可以進(jìn)行DNA/蛋白質(zhì)測(cè)試、總磷總氮測(cè)試、重金屬測(cè)試、農(nóng)藥殘留測(cè)試、食品安全檢測(cè)、熱力發(fā)電金屬離子測(cè)試等等。
原理是利用物質(zhì)的分子或離子對(duì)某一波長(zhǎng)范圍的光的吸收作用,對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析,定量分析及結(jié)構(gòu)分析,所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中的特定波長(zhǎng)的光而產(chǎn)生的吸收光譜。根據(jù)所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)不同,分為紫外分光光度法和可見(jiàn)光光度法,合稱(chēng)為紫外可見(jiàn)分光光度法。
可見(jiàn)分光光度計(jì)廣泛應(yīng)用于食品、藥品、電力、生物研究、教學(xué)科研、化學(xué)化工、質(zhì)量監(jiān)督、水質(zhì)環(huán)保和商檢等各大領(lǐng)域。V-1500PC型可見(jiàn)分光光度計(jì),波長(zhǎng)范圍:320nm-1100nm,能滿(mǎn)足不同物質(zhì)的測(cè)試。
可見(jiàn)分光光度計(jì)基本使用方法:
1、按“GOTOλ”鍵,輸入設(shè)定波長(zhǎng);
2、四個(gè)比色皿,其中R位置放置參比試樣,其余三個(gè)放入待測(cè)試樣。將比色皿放入樣品池內(nèi)的比色皿架中,蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路,按“ABS%”鍵,使儀器自動(dòng)調(diào)零和置滿(mǎn)度;
4、然后將待測(cè)試樣推入光路,顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測(cè)試樣的數(shù)據(jù)打印出,只需按“START/STOP”鍵即可。
雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)儀器),系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開(kāi)關(guān)(斬光器)分成為樣品和參比兩條光束結(jié)構(gòu)的儀器。
它能消除光源不穩(wěn)和放大器增益變化的影響,并能自動(dòng)記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。
儀器在開(kāi)機(jī)后通常會(huì)做一些自檢,但仍應(yīng)按本規(guī)程進(jìn)行檢定。儀器的波長(zhǎng)范圍包括195~800nm,狹縫為0.1~5nm可調(diào)。
工作原理
紫外可見(jiàn)分光光度法是利用物質(zhì)分子對(duì)紫外可見(jiàn)光譜區(qū)的輻射的吸收來(lái)進(jìn)行分析的一種儀器分析方法。
這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子能級(jí)的躍遷,它廣泛用于無(wú)機(jī)和有機(jī)物質(zhì)的定性和定量分析。
朗伯一一比耳定律(Lambet-Beer)是光吸收的基本定律,俗稱(chēng)光吸收定律,是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。
當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí),溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度(吸收光程)的函數(shù)。
其常用表達(dá)式如下(式中ε為系數(shù)):
A=ε·c·l
紫外見(jiàn)分光光度計(jì)是基于紫外可見(jiàn)分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計(jì)的不同,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)可以分為單光束分光光度計(jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。
制定依據(jù)
本規(guī)程主要參照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程《JJG178-2007紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計(jì)》、《JJF1641-2017紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)型式評(píng)價(jià)大綱》及《中國(guó)藥典》2015年版四部指導(dǎo)通則“0401紫外-可見(jiàn)分光光度法”擬定。
項(xiàng)目及技術(shù)要求
波長(zhǎng)準(zhǔn)確度≤±1.0nm(紫外光區(qū)),≤±2.0nm(500nm附近);
波長(zhǎng)重復(fù)性≤0.5nm。
基線(xiàn)平直度≤0.01吸光度。
0%線(xiàn)噪聲≤0.1%,100%線(xiàn)噪聲≤0.5%.
吸光度準(zhǔn)確度應(yīng)符合規(guī)定。
雜散光<0.8%。
光譜帶寬≤標(biāo)示帶寬±20%。
吸收池配對(duì)誤差≤0.5%。
檢測(cè)結(jié)果處理
自檢結(jié)果全部符合技術(shù)要求者,即為合格,可以使用。若檢測(cè)結(jié)果不符合規(guī)定,應(yīng)重新調(diào)試儀器再進(jìn)行自檢,符合規(guī)定后方可使用。
分光光度法是根據(jù)被測(cè)物質(zhì)分子對(duì)紫外、可見(jiàn)波段范圍單色輻射的吸收或反射強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的定性、定量或結(jié)構(gòu)分析的一種方法。
可見(jiàn)分光光度計(jì)的維護(hù):
1、保護(hù)光源:光源燈有一定的壽命,儀器不工作時(shí)不要開(kāi)燈,若工作間歇時(shí)間短,可不關(guān)燈。 一旦停機(jī),則要待燈冷卻后再重新啟動(dòng),并預(yù)熱15min。
燈泡發(fā)黑或亮度明顯減弱或不穩(wěn)定時(shí),就及時(shí)更換。 經(jīng)經(jīng)紫外光照射后形成結(jié)痕可用無(wú)水乙醇去除。
2、保證合適的工作環(huán)境溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。
不適宜的溫度和濕度可引起機(jī)械部件的銹蝕,使金屬鏡面的光潔度下降,引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光柵、反射鏡、聚焦鏡等光學(xué)部件的鋁膜銹蝕,產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等;甚至使儀器停止工作,從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正溫度和濕度。
3、定期清潔,保障環(huán)境和儀器內(nèi)衛(wèi)生條件,防塵。
儀器使用一定時(shí)間后,內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃,建議由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開(kāi)啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作,同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固,對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔,必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn),對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑,最后恢復(fù)原狀,再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校和記錄。
4、正確使用比色皿拿比色皿時(shí),手指只能捏住比色皿的毛玻璃面,不要碰比色皿的透光面,以免沾污。
清洗比色皿時(shí),先用水沖洗,再用蒸餾水洗凈。若被比色皿被有機(jī)物沾污,可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1:2)浸泡片刻,再用水沖洗。
每次做完實(shí)驗(yàn)應(yīng)立即洗凈比色皿。比色皿外壁的水用擦鏡紙或細(xì)軟的吸水紙吸干,以保護(hù)透光面。
可見(jiàn)分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、使用方便的單光束分光光度計(jì),基于樣品對(duì)單色光的選擇吸收特性可用于對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量分析。
廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)保監(jiān)測(cè)、食品生產(chǎn)和質(zhì)量控制等部門(mén)作定性、定量分析,還可作為大、專(zhuān)院校和中學(xué)相關(guān)課程的教學(xué)演示和實(shí)驗(yàn)儀器。